应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR退火温度
151/2返回列表12下一页
查看: 3570  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

bio_linda

[交流] PCR退火温度 已有2人参与

各位虫友大家好！
    我拿到的引物退火温度一个是69度，一个62度，PCR程序退火温度设多少合适呀？我做的梯度是从52到65的，低温时在2000和1500左右有微弱的条带（目的条带900左右），中间温度扩出来的在250到100之间有明亮的引物二聚体，高温没有任何条带。
    我想再重新p一次，请问大家，从这种结果看，我的退火温度取什么范围的梯度合适呀？还是要重新设计引物？
    O(∩_∩)O谢谢~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2009-08-13 19:09:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wangqk198738

金虫 (正式写手)

试验次数增加

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-14 19:08
amisking(金币+2,VIP+0): 8-14 19:08
要想成功你就得亲身经历，多试几次就行了，我做了不知道多少次！最终才确定好温度，别怕花老板的钱，可你老板要是经费很少的话，就算了。我P一个基因花了俩月，天天PCR，刚开始是调适温度和程序，而且还和机器有关，用惯了那台机器就不要再换了。
赞一下(22人) 回复此楼
6楼2009-08-14 12:15:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

sgba0307

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有出现过目的条带》？改变模板的浓度试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-08-13 19:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这么情况我们也遇到过，不过没有这么高的Tm值。我们一般是取中间温度，比如你这对引物，取64摄氏度应该可以扩出来的，但是估计会有杂带出现的。
赞一下(1人) 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
3楼2009-08-14 01:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genetics183

木虫 (正式写手)
应该避免两条引物Tm值相差太大。
赞一下 回复此楼
士虽有学，而行为本焉。
4楼2009-08-14 09:12:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxy11

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物的退火温度相差不要超过2度
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-08-14 11:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huij007

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最近也在PCR，开始摸索条件 挺郁闷的，不知道各种成分放多少？
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-08-14 16:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
根据楼主的描述似乎该重新设计引物
赞一下 回复此楼
8楼2009-08-14 17:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shensc727

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火温度太高了，相差也太大，建议重新设计引物！
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-08-14 18:27:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主，可以的话，把你的反应条件也说下。。。
我做PCR多，有些经验，一般两次就能把东西扩出来。。
你的退火温度我建议选55到60之间。
按照你说的情况，我认为的你的延伸时间有点过高了。如果你的模板是质粒，应该很轻松就可以扩了。。如果你的模板是真核基因组的话，可以加一些DMSO。
我建议你的反应条件可以这样:
95度，3分
95度20秒，60度30秒，72度1分，（循环数你要看你的模板浓度自己定，一般真核基因组用30到35个循环）
72度3分。
切记，如果是真核基因组的话，加一些DMSO。
如果还不行，可以尝试TOUCH DOWN PCR。。。即退火温度从65度到55度每个循环降一度，再55度退火保持20多个循环。。
祝顺利
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-08-14 19:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bio_linda 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307中医考研调剂 +7 于以采蘩 2026-04-14 7/350 2026-04-19 07:17 by 路病情
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿A区211，22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 求调剂 +3 我爱高数高数爱� 2026-04-12 3/150 2026-04-14 01:00 by 王珺璞
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭