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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR退火温度
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bio_linda

[交流] PCR退火温度 已有2人参与

各位虫友大家好！
    我拿到的引物退火温度一个是69度，一个62度，PCR程序退火温度设多少合适呀？我做的梯度是从52到65的，低温时在2000和1500左右有微弱的条带（目的条带900左右），中间温度扩出来的在250到100之间有明亮的引物二聚体，高温没有任何条带。
    我想再重新p一次，请问大家，从这种结果看，我的退火温度取什么范围的梯度合适呀？还是要重新设计引物？
    O(∩_∩)O谢谢~~
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1楼 2009-08-13 19:09:56
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

试验次数增加

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-14 19:08
amisking(金币+2,VIP+0): 8-14 19:08
要想成功你就得亲身经历，多试几次就行了，我做了不知道多少次！最终才确定好温度，别怕花老板的钱，可你老板要是经费很少的话，就算了。我P一个基因花了俩月，天天PCR，刚开始是调适温度和程序，而且还和机器有关，用惯了那台机器就不要再换了。
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6楼2009-08-14 12:15:52
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sgba0307

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有出现过目的条带》？改变模板的浓度试试
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2楼2009-08-13 19:39:26
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zhang6871

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这么情况我们也遇到过，不过没有这么高的Tm值。我们一般是取中间温度，比如你这对引物，取64摄氏度应该可以扩出来的，但是估计会有杂带出现的。
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
3楼2009-08-14 01:03:51
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genetics183

木虫 (正式写手)
应该避免两条引物Tm值相差太大。
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士虽有学，而行为本焉。
4楼2009-08-14 09:12:44
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