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bio_linda

[交流] PCR退火温度 已有2人参与

各位虫友大家好!
    我拿到的引物退火温度一个是69度,一个62度,PCR程序退火温度设多少合适呀?我做的梯度是从52到65的,低温时在2000和1500左右有微弱的条带(目的条带900左右),中间温度扩出来的在250到100之间有明亮的引物二聚体,高温没有任何条带。
    我想再重新p一次,请问大家,从这种结果看,我的退火温度取什么范围的梯度合适呀?还是要重新设计引物?
    O(∩_∩)O谢谢~~
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

试验次数增加

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-14 19:08
amisking(金币+2,VIP+0): 8-14 19:08
要想成功你就得亲身经历,多试几次就行了,我做了不知道多少次!最终才确定好温度,别怕花老板的钱,可你老板要是经费很少的话,就算了。我P一个基因花了俩月,天天PCR,刚开始是调适温度和程序,而且还和机器有关,用惯了那台机器就不要再换了。
6楼2009-08-14 12:15:52
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sgba0307

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有出现过目的条带》?改变模板的浓度试试
2楼2009-08-13 19:39:26
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zhang6871

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这么情况我们也遇到过,不过没有这么高的Tm值。我们一般是取中间温度,比如你这对引物,取64摄氏度应该可以扩出来的,但是估计会有杂带出现的。
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
3楼2009-08-14 01:03:51
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genetics183

木虫 (正式写手)

应该避免两条引物Tm值相差太大。
士虽有学,而行为本焉。
4楼2009-08-14 09:12:44
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