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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量pcr问题！求助
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回忆专用瓜

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr问题！求助

准备做荧光定量pcr， 使用的从RNA反转录出的cDNA，RNA的浓度大小从40-200都有，在反转录成cDNA时未调整浓度，这样做荧光定量pcr是否有影响？？？有影响的话是否有补救方法呢？求助大神们

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1楼 2017-11-28 17:17:51
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ahsoarli

捐助贵宾 (职业作家)

骑牛逛街
有影响，不知道你这是浓度高了还是低了？

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2楼2017-11-28 18:12:32
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回忆专用瓜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ahsoarli at 2017-11-28 18:12:32
有影响，不知道你这是浓度高了还是低了？

一共十多个时间点的基因，想看他们的差异，每个点的基因有的高有的低。请问我现在知道反转录前对应RNA的浓度，需要想办法稀释cDNA吗？

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3楼2017-11-28 19:10:45
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回忆专用瓜

新虫 (初入文坛)
如果我做荧光pcr的时候也跑一个内参基因的话，可以改正这种没有调整相同浓度cDNA的错误吗？

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4楼2017-11-28 20:23:26
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ahsoarli

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骑牛逛街
引用回帖:
3楼: Originally posted by 回忆专用瓜 at 2017-11-28 19:10:45
一共十多个时间点的基因，想看他们的差异，每个点的基因有的高有的低。请问我现在知道反转录前对应RNA的浓度，需要想办法稀释cDNA吗？
...

感觉对cdna定量后根据浓度上量比较好

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5楼2017-11-28 20:47:14
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回忆专用瓜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ahsoarli at 2017-11-28 20:47:14
感觉对cdna定量后根据浓度上量比较好
...

好的，那我重新做一下。请问浓度调整在多少差距内比较好？

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6楼2017-11-29 22:36:36
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ahsoarli

捐助贵宾 (职业作家)

骑牛逛街
这个要根据你试剂盒的说明了

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7楼2017-11-29 22:51:15
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allegory

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2017-11-30 09:00:54
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回忆专用瓜

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by allegory at 2017-11-30 09:00:54
建议先用仪器检测一下浓度，然后列个表格，调整上样量。

好的 感谢！

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9楼2017-12-02 00:30:56
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回忆专用瓜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ahsoarli at 2017-11-29 22:51:15
这个要根据你试剂盒的说明了

嗯嗯 感谢！！

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10楼2017-12-02 00:31:13
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