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转化感受态细胞，平板筛选不长菌？ 已有5人参与
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将提取的质粒（卡那抗性）转到BL21，阴性对照和实验组都没长菌，其中用到的BL21是课题组其他同学曾成功转化的，质粒的浓度是13.7ng/微升，10微升质粒对50微升BL21，接下来我要怎样修改实验方案才能转化成功？求给建议 发自小木虫Android客户端 |
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你拿个阳性质粒再转化试试，看看转化效率怎么样，感受态到底失活没有。如果没有那就是你转化步骤哪一步出问题了，可以把你的转化步骤发一下，给你参考参考。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-09-22 09:15:22
12楼2017-11-04 22:06:48
2楼2017-09-22 09:10:48
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你的感受态为什么要吸取50ul，一般不都是50ul或者100ul分装一个ep管的么。步骤没有什么大问题，我一般热激90s。从你的步骤看来很大概率是感受态不行了。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-09-22 09:51:19
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9楼2017-09-22 11:43:56
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质粒的量太多了了吧，热激时间有点短，一般是90s。不过这个应该不是问题。阴性对照和空白对照由于BL21菌株没有抗性所以不会长的。建议拿一个确定正常的质粒和一个确定没问题的感受态细胞分别做阳性对照。看下是你的质粒有问题还是BL21感受态细胞有问题 发自小木虫Android客户端 |
10楼2017-09-22 12:00:47
11楼2017-09-29 09:12:47
思之诚之
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初看后，两个建议：一是质粒浓度有点低，一般地，最少也有好几十纳克每微升，你可以考虑重提质粒；二是，可能这一批感受态有问题，不好；三是，其它不明原因，生物实验就是这样，如果不能反思出明显出错的地方，建议还是认真严谨地再重做，不要纠结于失败原因，因为很多永远也搞不清楚的。祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
14楼2018-01-05 00:10:09
3楼2017-09-22 09:13:06
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谢谢您。转化步骤是 1 无菌台中，于冰上，分别取50微升的BL21 和10微升质粒加到Ep管中 2 冰上放置30min 3 42℃热激45s 4 冰上放置1-2min 5 无菌台中，加入500微升37℃预热好的LB培养基，200rpm, 1h, 37℃ 6 浓缩: 没有在无菌台，6000rpm 3min离心，然后取出400微升，余下的160微升重悬， 7 涂平板: 无菌台中，用余下的160微升涂平板，（氨苄抗性，卡那抗性各涂了一个） 阴性对照: 无菌水代替了质粒 空白对照:什么都没加 实验结果: 所以平板都没有长 求建议。谢谢 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-09-22 09:37:45
7楼2017-09-22 10:10:48
mhhhwcf059 
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8楼2017-09-22 11:10:54
