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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化感受态细胞，平板筛选不长菌？
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mfl梅凤玲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:16
实验步骤没什么大问题，如果建议换感受态试试，你的质粒是用Nanodrop测的浓度吗？峰型怎么样，如果换感受态还是没有效果就可能是质粒的问题，建议重新提质粒
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11楼2017-09-29 09:12:47
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ytt1109

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 药娘子 at 2017-09-22 09:13:06
感受态细胞保存于-80℃，一般来说，50微升感受态细胞不是对应50-100ng的质粒吗？
...

正常情况下质粒加多了只会引起长的菌斑密度增加，不会不长菌，所以感受态失活的可能行比较大吧，换一下感受态吧，我最近做转化老不长菌，换了感受态就解决了哈。
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好好学习，天天向上。
12楼2017-11-04 22:06:48
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lemon201399

新虫 (初入文坛)
有可能是感受态的菌株系有问题，重新换一个株系做感受太试试

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13楼2018-01-03 09:19:07
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思之诚之

新虫 (正式写手)
初看后，两个建议：一是质粒浓度有点低，一般地，最少也有好几十纳克每微升，你可以考虑重提质粒；二是，可能这一批感受态有问题，不好；三是，其它不明原因，生物实验就是这样，如果不能反思出明显出错的地方，建议还是认真严谨地再重做，不要纠结于失败原因，因为很多永远也搞不清楚的。祝好！

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14楼2018-01-05 00:10:09
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒鉴定过嘛～建议鉴定一下质粒

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15楼2018-01-09 21:33:33
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superbadone

新虫 (初入文坛)
与质粒多少关系不大，抗性对的话，做阳转一试就知道质粒的问题还是感受态问题了

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16楼2018-01-31 21:38:43
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凌霄冻

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

存在两个问题，1.载体和目的片段的比例一般为1：3，你的质粒的浓度是13.7ng，那目的基因应该在40ng以上。
                        2.在涂板子的时候，涂布棒一定要冷却，不然全烫死了。
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17楼2018-02-07 11:34:10
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