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转化感受态细胞，平板筛选不长菌？已有5人参与
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将提取的质粒（卡那抗性）转到BL21，阴性对照和实验组都没长菌，其中用到的BL21是课题组其他同学曾成功转化的，质粒的浓度是13.7ng/微升，10微升质粒对50微升BL21，接下来我要怎样修改实验方案才能转化成功？求给建议 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2017-09-22 09:13:06
2楼2017-09-22 09:10:48
原来，是这样
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1087.4
- 散金: 1685
- 红花: 9
- 帖子: 282
- 在线: 483.5小时
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- 专业: 抗肿瘤药物药理
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:49
drwhoknowss: 金币+1, 可行 2018-02-08 04:02:28
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:49
drwhoknowss: 金币+1, 可行 2018-02-08 04:02:28
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你拿个阳性质粒再转化试试，看看转化效率怎么样，感受态到底失活没有。如果没有那就是你转化步骤哪一步出问题了，可以把你的转化步骤发一下，给你参考参考。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-09-22 09:15:22
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谢谢您。转化步骤是 1 无菌台中，于冰上，分别取50微升的BL21 和10微升质粒加到Ep管中 2 冰上放置30min 3 42℃热激45s 4 冰上放置1-2min 5 无菌台中，加入500微升37℃预热好的LB培养基，200rpm, 1h, 37℃ 6 浓缩: 没有在无菌台，6000rpm 3min离心，然后取出400微升，余下的160微升重悬， 7 涂平板: 无菌台中，用余下的160微升涂平板，（氨苄抗性，卡那抗性各涂了一个） 阴性对照: 无菌水代替了质粒 空白对照:什么都没加 实验结果: 所以平板都没有长 求建议。谢谢 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-09-22 09:37:45