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axiye

新虫 (小有名气)

[求助] 基因缺失的细胞可不可以用来制备感受态细胞 已有1人参与

如题,如果细菌菌株的某种基因缺失,能不能用来制备感受态细胞?

实验要求做基因缺失的补偿性实验,所以想把某基因敲除后再做成感受态细胞,转化带有该基因的质粒进行补偿
我试着用传统的方法把基因缺失的细胞制备成感受态,问题是转化和平板筛选都没有问题,克隆可以长出
但就是往这个细胞中转化什么蛋白都不表达?请问这是细胞本身的问题还是我实验这么设计本身就有问题?

希望有类似经验的XDJM给与指点
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古月木木

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
就是回复试验,另外带有该基因的质粒是怎样的,选择标记/穿梭质粒?完全可以做感受态
2楼2014-06-23 09:45:09
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axiye

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 古月木木 at 2014-06-23 09:45:09
就是回复试验,另外带有该基因的质粒是怎样的,选择标记/穿梭质粒?完全可以做感受态

什么意思,没看明白
3楼2014-06-26 10:56:01
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axiye

新虫 (小有名气)

是因为所转质粒为pET系列吗 ?该菌株的背景为E. COLI K-12 W3110,是否因为质粒与菌株的背景不匹配?
4楼2014-06-26 10:58:58
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古月木木

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by axiye at 2014-06-26 10:56:01
什么意思,没看明白...

你的要求不就是基因的回复突变吗,是吧?
5楼2014-06-26 11:05:31
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axiye

新虫 (小有名气)

是的,但我出现的问题是pET系列的载体转化进去不表达,不知道是什么原因,应该怎样解决?
6楼2014-06-26 15:49:39
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