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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化感受态细胞，平板筛选不长菌？
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药娘子

新虫 (小有名气)

[求助] 转化感受态细胞，平板筛选不长菌？ 已有5人参与

将提取的质粒（卡那抗性）转到BL21，阴性对照和实验组都没长菌，其中用到的BL21是课题组其他同学曾成功转化的，质粒的浓度是13.7ng/微升，10微升质粒对50微升BL21，接下来我要怎样修改实验方案才能转化成功？求给建议

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1楼 2017-09-22 09:06:29
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药娘子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 原来，是这样 at 2017-09-22 09:15:22
你拿个阳性质粒再转化试试，看看转化效率怎么样，感受态到底失活没有。如果没有那就是你转化步骤哪一步出问题了，可以把你的转化步骤发一下，给你参考参考。

谢谢您。转化步骤是
1 无菌台中，于冰上，分别取50微升的BL21 和10微升质粒加到Ep管中  
2 冰上放置30min
3 42℃热激45s
4 冰上放置1-2min
5 无菌台中，加入500微升37℃预热好的LB培养基，200rpm, 1h, 37℃
6 浓缩: 没有在无菌台，6000rpm 3min离心，然后取出400微升，余下的160微升重悬，
7 涂平板: 无菌台中，用余下的160微升涂平板，（氨苄抗性，卡那抗性各涂了一个）
阴性对照: 无菌水代替了质粒
空白对照:什么都没加
实验结果: 所以平板都没有长
求建议。谢谢

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5楼2017-09-22 09:37:45
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wwbqzhj

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-02-08 04:02:38
感受态怎么保存的，放了多久？质粒用量太大了吧，一般质粒用1~3ul就够了
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2楼2017-09-22 09:10:48
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药娘子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wwbqzhj at 2017-09-22 09:10:48
感受态怎么保存的，放了多久？质粒用量太大了吧，一般质粒用1~3ul就够了

感受态细胞保存于-80℃，一般来说，50微升感受态细胞不是对应50-100ng的质粒吗？

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3楼2017-09-22 09:13:06
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原来，是这样

金虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:49
drwhoknowss: 金币+1, 可行 2018-02-08 04:02:28
你拿个阳性质粒再转化试试，看看转化效率怎么样，感受态到底失活没有。如果没有那就是你转化步骤哪一步出问题了，可以把你的转化步骤发一下，给你参考参考。

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4楼2017-09-22 09:15:22
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