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药娘子

新虫 (小有名气)

[求助] 转化感受态细胞,平板筛选不长菌?已有5人参与

将提取的质粒(卡那抗性)转到BL21,阴性对照和实验组都没长菌,其中用到的BL21是课题组其他同学曾成功转化的,质粒的浓度是13.7ng/微升,10微升质粒对50微升BL21,接下来我要怎样修改实验方案才能转化成功?求给建议

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mfl梅凤玲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:16
实验步骤没什么大问题,如果建议换感受态试试,你的质粒是用Nanodrop测的浓度吗?峰型怎么样,如果换感受态还是没有效果就可能是质粒的问题,建议重新提质粒
11楼2017-09-29 09:12:47
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wwbqzhj

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-02-08 04:02:38
感受态怎么保存的,放了多久?质粒用量太大了吧,一般质粒用1~3ul就够了
2楼2017-09-22 09:10:48
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药娘子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wwbqzhj at 2017-09-22 09:10:48
感受态怎么保存的,放了多久?质粒用量太大了吧,一般质粒用1~3ul就够了

感受态细胞保存于-80℃,一般来说,50微升感受态细胞不是对应50-100ng的质粒吗?

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3楼2017-09-22 09:13:06
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原来,是这样

金虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:49
drwhoknowss: 金币+1, 可行 2018-02-08 04:02:28
你拿个阳性质粒再转化试试,看看转化效率怎么样,感受态到底失活没有。如果没有那就是你转化步骤哪一步出问题了,可以把你的转化步骤发一下,给你参考参考。

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4楼2017-09-22 09:15:22
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