24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 8481  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

药娘子

新虫 (小有名气)

[求助] 转化感受态细胞,平板筛选不长菌?已有5人参与

将提取的质粒(卡那抗性)转到BL21,阴性对照和实验组都没长菌,其中用到的BL21是课题组其他同学曾成功转化的,质粒的浓度是13.7ng/微升,10微升质粒对50微升BL21,接下来我要怎样修改实验方案才能转化成功?求给建议

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytt1109

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 药娘子 at 2017-09-22 09:13:06
感受态细胞保存于-80℃,一般来说,50微升感受态细胞不是对应50-100ng的质粒吗?
...

正常情况下质粒加多了只会引起长的菌斑密度增加,不会不长菌,所以感受态失活的可能行比较大吧,换一下感受态吧,我最近做转化老不长菌,换了感受态就解决了哈。
好好学习,天天向上。
12楼2017-11-04 22:06:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

wwbqzhj

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-02-08 04:02:38
感受态怎么保存的,放了多久?质粒用量太大了吧,一般质粒用1~3ul就够了
2楼2017-09-22 09:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

药娘子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wwbqzhj at 2017-09-22 09:10:48
感受态怎么保存的,放了多久?质粒用量太大了吧,一般质粒用1~3ul就够了

感受态细胞保存于-80℃,一般来说,50微升感受态细胞不是对应50-100ng的质粒吗?

发自小木虫Android客户端
3楼2017-09-22 09:13:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原来,是这样

金虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:49
drwhoknowss: 金币+1, 可行 2018-02-08 04:02:28
你拿个阳性质粒再转化试试,看看转化效率怎么样,感受态到底失活没有。如果没有那就是你转化步骤哪一步出问题了,可以把你的转化步骤发一下,给你参考参考。

发自小木虫Android客户端
4楼2017-09-22 09:15:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见