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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化感受态细胞，平板筛选不长菌？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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药娘子

新虫 (小有名气)

[求助] 转化感受态细胞，平板筛选不长菌？ 已有5人参与

将提取的质粒（卡那抗性）转到BL21，阴性对照和实验组都没长菌，其中用到的BL21是课题组其他同学曾成功转化的，质粒的浓度是13.7ng/微升，10微升质粒对50微升BL21，接下来我要怎样修改实验方案才能转化成功？求给建议

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1楼 2017-09-22 09:06:29
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小阳sunny

新虫 (初入文坛)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:01
质粒的量太多了了吧，热激时间有点短，一般是90s。不过这个应该不是问题。阴性对照和空白对照由于BL21菌株没有抗性所以不会长的。建议拿一个确定正常的质粒和一个确定没问题的感受态细胞分别做阳性对照。看下是你的质粒有问题还是BL21感受态细胞有问题

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快乐做研究!
10楼2017-09-22 12:00:47
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wwbqzhj

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-02-08 04:02:38
感受态怎么保存的，放了多久？质粒用量太大了吧，一般质粒用1~3ul就够了
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2楼2017-09-22 09:10:48
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药娘子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wwbqzhj at 2017-09-22 09:10:48
感受态怎么保存的，放了多久？质粒用量太大了吧，一般质粒用1~3ul就够了

感受态细胞保存于-80℃，一般来说，50微升感受态细胞不是对应50-100ng的质粒吗？

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3楼2017-09-22 09:13:06
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原来，是这样

金虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-09 21:43:49
drwhoknowss: 金币+1, 可行 2018-02-08 04:02:28
你拿个阳性质粒再转化试试，看看转化效率怎么样，感受态到底失活没有。如果没有那就是你转化步骤哪一步出问题了，可以把你的转化步骤发一下，给你参考参考。

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4楼2017-09-22 09:15:22
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