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rdc5190

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE 跑胶问题 已有1人参与

最近在跑电泳,统一上样蛋白量,想观察一下目的蛋白(18KD、190KD)左右在不同诱导期的表达情况,试下可不可行。跑出来的胶如下图1(彩色)、图2(灰色),发现大分子量的蛋白没有分开,小分子量的蛋白出现幻影。请问这是什么问题?该如何改进。
5%的浓缩胶  8%的分离胶   上样缓冲液是6X loading buffer   充分振荡,开水反应5min,离心。上样量10uL
电泳条件:80v 30min  120v 120min

SDS-PAGE 跑胶问题
1.jpg


SDS-PAGE 跑胶问题-1
2.jpg
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袁小小然

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
rdc5190: 金币+1, ★有帮助, 分子量分布太广,比较难在一张图上显示 2017-09-21 11:54:57
8%的分离胶很难分离30KD以下的蛋白了,建议你提高分离胶的浓度。用15%以上的胶,或者用梯度胶来做,效果会很明显的。
无
6楼2017-09-14 21:39:50
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普通回帖

那半句誓言

金虫 (正式写手)

8%的胶大分子本来就分得不好啊 我们一般煮8-10分钟

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2楼2017-08-31 19:58:38
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gxx2lm

木虫 (正式写手)

建议选用梯度胶,要不然就把两个分子量的蛋白用不同浓度的胶分别跑

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-08-31 20:40:01
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rdc5190

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 那半句誓言 at 2017-08-31 19:58:38
8%的胶大分子本来就分得不好啊 我们一般煮8-10分钟

大分子要用多少的胶才能分的好
4楼2017-08-31 20:51:59
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rdc5190

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gxx2lm at 2017-08-31 20:40:01
建议选用梯度胶,要不然就把两个分子量的蛋白用不同浓度的胶分别跑

这是我用12%跑出来的胶,小分子区域出现了很明显的拖带现象。总体很模糊
SDS-PAGE 跑胶问题-2
DC8.15(12%)A_副本.jpg

5楼2017-08-31 20:59:44
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小陈陈?~

新虫 (初入文坛)

你用12%的就可以,我们33kd,可以跑出来,我用15%跑的更好一点,你的loading buffer是不是太浓了?

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7楼2017-09-15 08:09:17
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Lxs006

铁虫 (初入文坛)

8楼2017-09-18 08:37:39
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rdc5190

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小陈陈?~ at 2017-09-15 08:09:17
你用12%的就可以,我们33kd,可以跑出来,我用15%跑的更好一点,你的loading buffer是不是太浓了?

我用15%的分离胶跑出来,整个胶很硬像塑料一样。边缘会卷起来,你的会吗

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9楼2017-09-21 11:52:21
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rdc5190

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Lxs006 at 2017-09-18 08:37:39
可以试一试Tricine-SDS PAGE

我试试

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10楼2017-09-21 11:53:24
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