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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于SDS-PAGE跑胶问题
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khl8889

新虫 (小有名气)

[求助] 关于SDS-PAGE跑胶问题 已有6人参与

SDS PAGE电泳后，发现大部分蛋白在浓缩胶与分离胶交界处，跑不下去，如附件图所示。不知是何原因？十分焦急！！！请各位虫友指点。

关于SDS-PAGE跑胶问题
20151125_150606.jpg
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1楼 2015-11-26 13:47:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

why0393

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果中间没样本就尽量靠近中间加样吧，一般这种问题和缓冲液的关系非常大，建议更换新配的缓冲液
偶看到蛋白marker和第二列中间条带有些偏向了，好像是加浓缩胶前分离胶上层没弄干净，或者漏样了。
另外，加样量可以再减少些
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12345
2楼2015-11-26 13:56:45
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普通回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要么胶的浓度有问题，不同浓度的胶适用的分子量大小不太一样，自己查查，要么电泳缓冲液有问题，重新配新的，还有点样量少一些。跑的时间在长点。祝顺利
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3楼2015-11-26 14:17:16
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khl8889

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2015-11-26 14:17:16
要么胶的浓度有问题，不同浓度的胶适用的分子量大小不太一样，自己查查，要么电泳缓冲液有问题，重新配新的，还有点样量少一些。跑的时间在长点。祝顺利

非常感谢！我重新配缓冲液试试。
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4楼2015-11-26 23:59:56
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker跑开了（到底有没有完全跑开你可以根据你的marker信息看一下），那么应该就是你上样量太大，建议上样量小点，可以做个梯度上样量看看哪个比较合适。
另外楼主的胶是串样还是最后面的也点样了？
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5楼2015-11-27 00:52:07
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khl8889

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2015-11-27 00:52:07
marker跑开了（到底有没有完全跑开你可以根据你的marker信息看一下），那么应该就是你上样量太大，建议上样量小点，可以做个梯度上样量看看哪个比较合适。
另外楼主的胶是串样还是最后面的也点样了？

所有孔都点样了包括最后面的，只不过是不同的样品。
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6楼2015-11-27 06:19:59
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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7楼2015-11-27 06:40:00
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白质量不行，胶浓度不适合，这是俩最可能的原因。
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8楼2015-11-29 09:19:02
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得楼主在制备蛋白样品时，离心吸取上清液时候把沉淀也吸走了吧。才导致你这样品分离不下去。
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9楼2015-12-04 15:22:47
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朕不杀你

新虫 (初入文坛)
分离胶浓了吧
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10楼2015-12-05 17:17:16
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