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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 大肠杆菌转化后，挑的单菌落PCR，没有条带是真的没连上吗，我都做了好几次了
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yuriname

新虫 (小有名气)
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大肠杆菌转化后，挑的单菌落PCR，没有条带是真的没连上吗，我都做了好几次了
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最近一直在做DNA连接，挑取的单菌落摇完后，PCR，没有条带是真的没连上吗，是否有什么需要注意的问题，我的是单酶切

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1楼 2017-03-13 07:43:14
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九生123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 九生123 at 2017-03-13 08:13:51
单酶切容易载体自连，酶切後的载体需要去磷酸化，做了吗？

不然的话，绝大部分是空载体

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23楼2017-03-13 08:14:28
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九生123

新虫 (小有名气)
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单酶切容易载体自连，酶切後的载体需要去磷酸化，做了吗？

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22楼2017-03-13 08:13:51
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yuriname

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 九生123 at 2017-03-13 08:13:51
单酶切容易载体自连，酶切後的载体需要去磷酸化，做了吗？

把质粒去磷酸化了

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24楼2017-03-14 17:15:34
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aaa20130201

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是假阳性，或者你pcr反应体系中量加的不合理，个人感觉双酶切好一些。
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25楼2017-03-16 19:28:23
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你好先生121

铁虫 (小有名气)
有可能是假阳性

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26楼2017-05-04 00:23:29
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莫等闲1112楼
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宝云络3楼
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毛毛虫6666楼
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shi80624118楼
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oldtimeyoung9楼
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嘿嘿嘿火箭10楼
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lhsyfh11楼
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幽安妮12楼
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杨天山13楼
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cuijg14楼
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随堂测验青青15楼
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hit072516楼
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忆雨浩繁17楼
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YIMO1118楼
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hechuncan19楼
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siwaxingge12220楼
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Shenheidan21楼
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