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关于蛋白的复性已有3人参与
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表达了一个蛋白，融合组氨酸标签总共大小72kD左右，目前WB已经做出来了，诱导没问题但是都在沉淀里上清几乎没有，诱导条件也优化了没有什么改善，所以打算做复性，我看了一下序列，半胱氨酸有十几个，复性的时候会不会比较困难？柱上复性有哪些比较可靠的方法？还有就是假如复性成功了怎么区别复性和未复性的蛋白呢？有说可以跑非变性电泳，这块我不太明白 @hc-material @gyesang 发自小木虫IOS客户端 |
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蓝洋飘雪
木虫 (小有名气)
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- 专业: 兽医药理学与毒理学
6楼2016-12-31 11:39:42
2楼2016-12-29 12:08:21
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可以尝试不同载体表达，比如psumo载体等。低温诱导是个好办法，降低iptg浓度等估计你也尝试了。对于是否复性成功，还是跑个非还原电泳吧。你的蛋白半胱氨酸多，很可能出现错配的大分子量多聚体，即便是挂柱了，也不是天然结构 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-12-29 12:57:24
4楼2016-12-31 11:33:10