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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于scFv的二硫键复性
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dy_414

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于scFv的二硫键复性 已有2人参与

本人在做单链抗体scFv，为了提高分子稳定性在VH和VL中间突变了一个链间二硫键（G-C，S-C）然后进行复性。现在用的方法是滴定复性，反应体系pH为8.1（蛋白等电点大约在6.8）thiol-disulfide exchange反应的电势由GSSG/GSH (1:10)提供。试过很多条件，包括体系pH，GSSG/GSH浓度及比例，复性液中变性剂浓度等等，但是始终没有特别好的结果。有过一次稳定性不错的实验，但是非还原电泳显示复性的蛋白是一个混合物.

目前已经请教了几乎能请教到的老师和博士，大家把能出的主意都出了，但是几乎没有像样的数据（文献很多都可以，但是没有一个能重复出来的）。望诸位高手给予协助，谢谢！
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我坚信，rp是攒出来的
1楼 2010-03-04 11:58:39
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dy_414

木虫 (正式写手)
自己顶一下
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我坚信，rp是攒出来的
2楼2010-03-04 17:13:24
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muchong5577

金虫 (正式写手)
dy_414(金币+1): 2010-03-04 22:37
帮你顶一下  呵呵
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3楼2010-03-04 21:28:57
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-03-04 21:28:57:
帮你顶一下  呵呵

谢谢
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我坚信，rp是攒出来的
4楼2010-03-04 22:37:23
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dy_414

木虫 (正式写手)
再顶一下
5楼2010-03-05 09:58:56
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njzh1986

金虫 (小有名气)
dy_414(金币+1): 2010-05-29 21:39:35
呵呵。。这东东俺们不懂啊。。帮楼主顶一下吧。。呵呵。。重复别人的条件也做不出来的确是一件很郁闷的事情。。
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知识改变命运，励志照耀人生
6楼2010-03-05 10:51:37
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lliu

新虫 (小有名气)
dy_414(金币+1): 2010-03-05 14:43
dy_414(金币+5): 2010-05-29 21:39:47
scFv的refold情况主要是由一级结构所决定，外在的复性条件影响很有限。所以，你如果想得到好的活性蛋白（我猜测你是从包涵体着手的），需要改造其一级结构，例如，去除序列中那些暴露的疏水Patches, 等等。当然，这并不容易。
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7楼2010-03-05 11:53:21
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dy_414

木虫 (正式写手)
改造数个氨基酸么？
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我坚信，rp是攒出来的
8楼2010-03-05 15:57:19
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lliu at 2010-03-05 11:53:21:
scFv的refold情况主要是由一级结构所决定，外在的复性条件影响很有限。所以，你如果想得到好的活性蛋白（我猜测你是从包涵体着手的），需要改造其一级结构，例如，去除序列中那些暴露的疏水Patches, 等等。当然， ...

改造氨基酸么？
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我坚信，rp是攒出来的
9楼2010-03-05 15:57:40
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dy_414

木虫 (正式写手)
再顶顶，版主多包涵
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我坚信，rp是攒出来的
10楼2010-03-06 13:25:32
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