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dy_414木虫 (正式写手)
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【求助/交流】关于scFv的二硫键复性已有2人参与
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本人在做单链抗体scFv，为了提高分子稳定性在VH和VL中间突变了一个链间二硫键（G-C，S-C）然后进行复性。现在用的方法是滴定复性，反应体系pH为8.1（蛋白等电点大约在6.8）thiol-disulfide exchange反应的电势由GSSG/GSH (1:10)提供。试过很多条件，包括体系pH，GSSG/GSH浓度及比例，复性液中变性剂浓度等等，但是始终没有特别好的结果。有过一次稳定性不错的实验，但是非还原电泳显示复性的蛋白是一个混合物. 目前已经请教了几乎能请教到的老师和博士，大家把能出的主意都出了，但是几乎没有像样的数据（文献很多都可以，但是没有一个能重复出来的）。望诸位高手给予协助，谢谢！ |
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