应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于scFv的二硫键复性
131/2返回列表12下一页
查看: 2521  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dy_414

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于scFv的二硫键复性 已有2人参与

本人在做单链抗体scFv，为了提高分子稳定性在VH和VL中间突变了一个链间二硫键（G-C，S-C）然后进行复性。现在用的方法是滴定复性，反应体系pH为8.1（蛋白等电点大约在6.8）thiol-disulfide exchange反应的电势由GSSG/GSH (1:10)提供。试过很多条件，包括体系pH，GSSG/GSH浓度及比例，复性液中变性剂浓度等等，但是始终没有特别好的结果。有过一次稳定性不错的实验，但是非还原电泳显示复性的蛋白是一个混合物.

目前已经请教了几乎能请教到的老师和博士，大家把能出的主意都出了，但是几乎没有像样的数据（文献很多都可以，但是没有一个能重复出来的）。望诸位高手给予协助，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我坚信，rp是攒出来的
1楼 2010-03-04 11:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
自己顶一下
回复此楼
我坚信，rp是攒出来的
2楼2010-03-04 17:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
dy_414(金币+1): 2010-03-04 22:37
帮你顶一下  呵呵
回复此楼
3楼2010-03-04 21:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2010-03-04 21:28:57:
帮你顶一下  呵呵

谢谢
回复此楼
我坚信，rp是攒出来的
4楼2010-03-04 22:37:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
再顶一下
5楼2010-03-05 09:58:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njzh1986

金虫 (小有名气)
dy_414(金币+1): 2010-05-29 21:39:35
呵呵。。这东东俺们不懂啊。。帮楼主顶一下吧。。呵呵。。重复别人的条件也做不出来的确是一件很郁闷的事情。。
赞一下 回复此楼
知识改变命运，励志照耀人生
6楼2010-03-05 10:51:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lliu

新虫 (小有名气)
dy_414(金币+1): 2010-03-05 14:43
dy_414(金币+5): 2010-05-29 21:39:47
scFv的refold情况主要是由一级结构所决定，外在的复性条件影响很有限。所以，你如果想得到好的活性蛋白（我猜测你是从包涵体着手的），需要改造其一级结构，例如，去除序列中那些暴露的疏水Patches, 等等。当然，这并不容易。
赞一下 回复此楼
7楼2010-03-05 11:53:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
改造数个氨基酸么？
赞一下 回复此楼
我坚信，rp是攒出来的
8楼2010-03-05 15:57:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lliu at 2010-03-05 11:53:21:
scFv的refold情况主要是由一级结构所决定，外在的复性条件影响很有限。所以，你如果想得到好的活性蛋白（我猜测你是从包涵体着手的），需要改造其一级结构，例如，去除序列中那些暴露的疏水Patches, 等等。当然， ...

改造氨基酸么？
回复此楼
我坚信，rp是攒出来的
9楼2010-03-05 15:57:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
再顶顶，版主多包涵
赞一下 回复此楼
我坚信，rp是攒出来的
10楼2010-03-06 13:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dy_414 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭