应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于酶切的问题
151/2返回列表12下一页
查看: 2665  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

天行健071787

金虫 (小有名气)

[求助] 关于酶切的问题 已有6人参与

求解！！！
最近在构建载体时发现用的内切酶AscI就是切不开，载体上该位点序列是正确的，应该怎么办，着急啊，跪求大家提供建议或办法，非常感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
自立自强，永不言败！
1楼 2016-11-18 21:58:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
空载体的话用这一个酶单切都切不开吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
···
2楼2016-11-18 23:05:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fxpckut215
祝福
3楼2016-11-19 13:44:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天行健071787

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fxpckut215 at 2016-11-19 13:44:07
祝福

4楼2016-11-21 11:35:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longlinbio
祝福
5楼2016-11-21 12:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

010308Jing

木虫 (正式写手)
是不是被修饰过的？实在不行就换个酶吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-11-21 15:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

General_007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你怎么知道有没有切开，有没有把酶切后纯化回收的载体转入DH5a或者TOP10，看看能不能长出了，如果长不出来，就应该切开了，
赞一下 回复此楼
7楼2016-11-22 15:45:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天行健071787

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by General_007 at 2016-11-22 15:45:32
你怎么知道有没有切开，有没有把酶切后纯化回收的载体转入DH5a或者TOP10，看看能不能长出了，如果长不出来，就应该切开了，

检测的时候点了对照的（没有酶切的质粒）
赞一下 回复此楼
自立自强，永不言败！
8楼2016-11-22 16:03:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yueping

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先看一下您的整个片段上AscI酶切位点有几处，然后调节酶的用量。
另外可以适当延长酶切时间，调节整个酶切体系。建议50ul酶切。
赞一下 回复此楼
9楼2016-11-23 13:30:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

试试用甲基化酶缺陷的大肠杆菌（jm110）感受态细胞转化再提质粒，切不开有可能是因为酶切位点甲基化引起的。
赞一下 回复此楼
知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
10楼2016-12-04 21:22:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 天行健071787 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 PYZmcHr5kSaq 2026-11-05 8/400 2026-11-06 06:16 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 05:54 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:15 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:26 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 01:29 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 01:20 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭