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fannis

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[求助] HPLC峰的保留位置不一致是什么问题？已有8人参与

各位大神，

小弟最近用hplc分离样品，目前分离到最后只剩了简单的几个峰，流动相是乙腈和水。等梯度洗脱的时候，峰相对来说是可以分开的，但是每次峰的保留位置总是不太一致，忽前忽后，由于需要单独收集单个峰进行下一步的实验。所以想问一下各位，造成这种情况可能的原因是什么？

稍后上图。

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爱生活爱媳妇儿~

1楼 2016-09-20 00:38:45

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376zfm

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【答案】应助回帖

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我也曾出现过这样的情况，当时判断的原因是流动相混合后，温度不均匀导致的，因为乙腈和水混合是明显吸热的，导致整个体系温度不均匀，进一步导致流动相体积和比例的不均匀，从而影响重复性。建议你两相混匀后走样，也可以水相用50%乙腈水溶液，这样配置流动相会比较方便点，然后计算出相应比例走样。这样就可以显著改善重复性。~这是流动相的问题，也有可能存在其他原因，诸如仪器比例阀故障、仪器污染等。~欢迎继续讨论。