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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 同一物质 同次进样 保留时间不同
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silverinch

新虫 (初入文坛)

[求助] 同一物质 同次进样 保留时间不同

求助HPLC达人。
本人做了一个蛋白酶切样品的HPLC反相柱子分离。结果有一个多肽在两个不同位置出峰（间隔大约5 min左右），其他多肽没有这种情况。而且经过氨基酸测序鉴定，这两个峰的的确确是一个东西。怎么解释啊？
为什么在多肽混合物中有且只有一个肽段出现这种情况？
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1楼 2011-11-24 16:03:22
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foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
408851978(金币+1): 多多交流 2011-11-25 08:30:01
走梯度吗？如果是的话，检测下前一针和后一针的平衡是否足够
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yyh
2楼2011-11-24 16:15:34
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silverinch

新虫 (初入文坛)
不是啊 是同一针进样 然后在一个色谱图中的有两个峰 经过鉴定 那两个峰是一个东西
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3楼2011-11-24 18:05:39
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天空蔚蓝

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你用的液相是哪种型号？这种情况出现了几次？你怎么做的测序？
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坚定你所坚持的，生活就有希望！
4楼2011-11-24 19:34:50
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herosen

银虫 (小有名气)
我觉得会不会是没有平衡的原因，还是梯度问题，或者是重新换了流动相呢？。楼主好好回忆一下，一般测定标准样品和实际样品都是对保留时间的
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5楼2011-11-24 23:05:45
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silverinch

新虫 (初入文坛)
液相是瓦里安的 检测是根据一次和二次 MALDI-TOF鉴定的
没有换流动相 每次做这个肽段混合物 都会出现这个问题
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6楼2011-11-25 08:09:27
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lg123456

木虫 (正式写手)
来 学习
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给你点菊花，你就灿烂！
7楼2011-11-25 14:38:40
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silverinch

新虫 (初入文坛)
是不是有可能是非对映异构体？但是这个多肽是蛋白胰蛋白切的产物 该蛋白是由大肠杆菌发酵得来的  会产生非对映体？变成生物的问题了
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8楼2011-11-25 15:43:08
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grandstone

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得酶切后做个SDS-PAGE看看样品中多肽纯度怎么样，如果很纯的话会不会是浓度太高了？纯属个人意见
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9楼2011-11-25 15:56:40
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jingmx2008

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

天气变化小心感冒
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10楼2011-11-25 15:59:57
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