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silverinch

新虫 (初入文坛)

[求助] 同一物质 同次进样 保留时间不同

求助HPLC达人。
本人做了一个蛋白酶切样品的HPLC反相柱子分离。结果有一个多肽在两个不同位置出峰(间隔大约5 min左右),其他多肽没有这种情况。而且经过氨基酸测序鉴定,这两个峰的的确确是一个东西。怎么解释啊?
为什么在多肽混合物中有且只有一个肽段出现这种情况?
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foxling2

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


408851978(金币+1): 多多交流 2011-11-25 08:30:01
走梯度吗?如果是的话,检测下前一针和后一针的平衡是否足够
yyh
2楼2011-11-24 16:15:34
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silverinch

新虫 (初入文坛)

不是啊 是同一针进样 然后在一个色谱图中的有两个峰 经过鉴定 那两个峰是一个东西
3楼2011-11-24 18:05:39
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天空蔚蓝

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你用的液相是哪种型号?这种情况出现了几次?你怎么做的测序?
坚定你所坚持的,生活就有希望!
4楼2011-11-24 19:34:50
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herosen

银虫 (小有名气)

我觉得会不会是没有平衡的原因,还是梯度问题,或者是重新换了流动相呢?。楼主好好回忆一下,一般测定标准样品和实际样品都是对保留时间的
5楼2011-11-24 23:05:45
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silverinch

新虫 (初入文坛)

液相是瓦里安的 检测是根据一次和二次 MALDI-TOF鉴定的
没有换流动相 每次做这个肽段混合物 都会出现这个问题
6楼2011-11-25 08:09:27
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lg123456

木虫 (正式写手)

来 学习
给你点菊花,你就灿烂!
7楼2011-11-25 14:38:40
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silverinch

新虫 (初入文坛)

是不是有可能是非对映异构体?但是这个多肽是蛋白胰蛋白切的产物 该蛋白是由大肠杆菌发酵得来的  会产生非对映体?变成生物的问题了
8楼2011-11-25 15:43:08
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grandstone

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得酶切后做个SDS-PAGE看看样品中多肽纯度怎么样,如果很纯的话会不会是浓度太高了?纯属个人意见
9楼2011-11-25 15:56:40
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jingmx2008

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

天气变化小心感冒
10楼2011-11-25 15:59:57
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