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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 按照别人文章的方法处理血样，结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳，求指点！
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alor

银虫 (初入文坛)

[求助] 按照别人文章的方法处理血样，结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳，求指点！已有1人参与

第一次发帖求助，希望各位高手不吝赐教！

情况如下：
血样前处理：
    取50ul血浆，加200ul甲醇，涡旋15s，再加入300ul乙酸乙酯，涡旋15s。12000rpm，离心，去上清液440ul，氮吹至干。300ul流动相复溶，进样20ul检测。
HPLC色谱条件：
    流动相：乙腈-水（40-60）
    流速：1ml/min
    检测波长：230nm
结果：
   第一针进样，结果很顺利，保留时间9.3min，基线也很平，跑到第20min结束
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263508_351.jpg
5min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263508_300.jpg
9.29min处的紫外
第二针进样，结果还好，但是在10min以后开始出现起伏
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263732_206.jpg
10min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263733_526.jpg
9.32min处的紫外
第五针进样，药物出峰的位置已经严重波动了，紫外也变得奇异了
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263864_931.jpg
25min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263865_437.jpg
紫外结果出现疑似杂志的情况
第六针波动仍然存在，看起来好像情况变好了，但是看完紫外就整个人都不好了
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263865_572.jpg
30min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263865_201.jpg
紫外结果
之前有做过空白血样，结果跟第一针类似，只是在药物保留时间是空白而已，但是现在，居然完完全全变成杂质的峰，这该如何是好？
第九针（120min）这已经完全无法入眼了这都什么乱七八糟的东西啊
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263866_463.jpg
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263864_108.jpg

情况说明我在上周有做过预实验（一只大鼠灌胃给药），根本没有出现这个问题。大约在3h点就已经检测不到了。

完全处于迷惘当中，希望高人指点打救，感谢不尽！

按照别人文章的方法处理血样，结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳，求指点！
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按照别人文章的方法处理血样，结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳，求指点！-1
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按照别人文章的方法处理血样，结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳，求指点！-9
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1楼2014-04-23 22:56:05
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alor

银虫 (初入文坛)
第一次发帖，图片排版有点乱，全都跑下面去了
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2楼2014-04-23 22:57:43
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alor

银虫 (初入文坛)
刚才用流动相冲了1个小时柱子，然后重新进了一针（第五时间点）发现又能很良好分离出来
这是要我每针跑1个小时的节奏吗？我会疯掉的

另外，这个药的生物样品多用UPLC作检测（保留时间大概是3min），但是HPLC也有人用。
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3楼2014-04-23 23:32:21
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haoruijia8

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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alor: 金币+50, ★★★很有帮助 2014-10-14 10:14:37
应该是内源性物质的干扰，有一些极性很小的内源性物质在干扰测定，且你当前的流动相条件下会很晚出来，你可以考虑下使用梯度洗脱，就是时间比较长，这样的话极性小的东西也可以冲出来了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-05-22 15:48:26
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sekiwang

至尊木虫 (知名作家)
“应该是内源性物质的干扰，有一些极性很小的内源性物质在干扰测定，且你当前的流动相条件下会很晚出来，你可以考虑下使用梯度洗脱，就是时间比较长，这样的话极性小的东西也可以冲出来了”
正解！
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5楼2014-05-22 17:17:49
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