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alor

银虫 (初入文坛)

[求助] 按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点! 已有1人参与

第一次发帖求助,希望各位高手不吝赐教!

情况如下:
血样前处理:
    取50ul血浆,加200ul甲醇,涡旋15s,再加入300ul乙酸乙酯,涡旋15s。12000rpm,离心,去上清液440ul,氮吹至干。300ul流动相复溶,进样20ul检测。
HPLC色谱条件:
    流动相:乙腈-水(40-60)
    流速:1ml/min
    检测波长:230nm
结果:
   第一针进样,结果很顺利,保留时间9.3min,基线也很平,跑到第20min结束
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263508_351.jpg
5min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263508_300.jpg
9.29min处的紫外
第二针进样,结果还好,但是在10min以后开始出现起伏
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263732_206.jpg
10min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263733_526.jpg
9.32min处的紫外
第五针进样,药物出峰的位置已经严重波动了,紫外也变得奇异了
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263864_931.jpg
25min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263865_437.jpg
紫外结果出现疑似杂志的情况
第六针波动仍然存在,看起来好像情况变好了,但是看完紫外就整个人都不好了
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263865_572.jpg
30min时间点血样结果
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263865_201.jpg
紫外结果
之前有做过空白血样,结果跟第一针类似,只是在药物保留时间是空白而已,但是现在,居然完完全全变成杂质的峰,这该如何是好?
第九针(120min)这已经完全无法入眼了这都什么乱七八糟的东西啊
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263866_463.jpg
http://d.kankan3d.com/file/data/ ... _1398263864_108.jpg

情况说明我在上周有做过预实验(一只大鼠灌胃给药),根本没有出现这个问题。大约在3h点就已经检测不到了。

完全处于迷惘当中,希望高人指点打救,感谢不尽!

按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-1
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-2
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-3
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-4
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-5
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-6
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-7
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-8
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按照别人文章的方法处理血样,结果因为杂质影响导致随后结果基线不稳,求指点!-9
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alor

银虫 (初入文坛)

刚才用流动相冲了1个小时柱子,然后重新进了一针(第五时间点)发现又能很良好分离出来
这是要我每针跑1个小时的节奏吗?我会疯掉的

另外,这个药的生物样品多用UPLC作检测(保留时间大概是3min),但是HPLC也有人用。
3楼2014-04-23 23:32:21
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alor

银虫 (初入文坛)

第一次发帖,图片排版有点乱,全都跑下面去了
2楼2014-04-23 22:57:43
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haoruijia8

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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alor: 金币+50, ★★★很有帮助 2014-10-14 10:14:37
应该是内源性物质的干扰,有一些极性很小的内源性物质在干扰测定,且你当前的流动相条件下会很晚出来,你可以考虑下使用梯度洗脱,就是时间比较长,这样的话极性小的东西也可以冲出来了
4楼2014-05-22 15:48:26
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sekiwang

至尊木虫 (知名作家)

“应该是内源性物质的干扰,有一些极性很小的内源性物质在干扰测定,且你当前的流动相条件下会很晚出来,你可以考虑下使用梯度洗脱,就是时间比较长,这样的话极性小的东西也可以冲出来了”
正解!
5楼2014-05-22 17:17:49
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