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fannis

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC峰的保留位置不一致是什么问题? 已有8人参与

各位大神,

小弟最近用hplc分离样品,目前分离到最后只剩了简单的几个峰,流动相是乙腈和水。等梯度洗脱的时候,峰相对来说是可以分开的,但是每次峰的保留位置总是不太一致,忽前忽后,由于需要单独收集单个峰进行下一步的实验。所以想问一下各位,造成这种情况可能的原因是什么?

稍后上图。
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爱生活爱媳妇儿~
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回帖置顶 ( 共有1个 )

fannis

金虫 (正式写手)

fannis: 回帖置顶 2016-09-30 10:51:25
引用回帖:
2楼: Originally posted by shi102241218 at 2016-09-20 08:44:22
梯度洗脱就是存在这个问题,真个没被办法,加标吧

结果如图所示。

平时我用另一根C18的柱子分离复杂的样品,出来的峰的保留时间基本上是一模一样的,前后进100个样基本都一致。但是接着分离,换了一根更精确的柱子,结果出来的峰时间还经常波动,基本每次都会不一样的。用的剃度是乙腈21%,水79%等剃度洗脱。
HPLC峰的保留位置不一致是什么问题?
Screen Shot 2016-09-19 at 9.03.32 PM.png

爱生活爱媳妇儿~
5楼2016-09-20 11:08:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

376zfm

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也曾出现过这样的情况,当时判断的原因是流动相混合后,温度不均匀导致的,因为乙腈和水混合是明显吸热的,导致整个体系温度不均匀,进一步导致流动相体积和比例的不均匀,从而影响重复性。建议你两相混匀后走样,也可以水相用50%乙腈水溶液,这样配置流动相会比较方便点,然后计算出相应比例走样。这样就可以显著改善重复性。~这是流动相的问题,也有可能存在其他原因,诸如仪器比例阀故障、仪器污染等。~欢迎继续讨论。
13楼2016-09-20 17:04:13
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瘦男人

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有个建议供参考,你的机器有柱温箱吗,有没有可能柱温不一致造成的。
生活不只有阳光,还有菜花和狗粪。
17楼2016-09-22 08:21:47
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antelopeyy

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
等度洗脱+梯度洗脱?难道你是用多瓶单独分开的不同比例的流动相,一瓶一瓶上泵,形成梯度洗脱的?
你可以试试在每一针之间都加一针标品,如果标品也漂移到一样的位置的话,直接收集就好了。
14楼2016-09-20 17:14:27
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普通回帖

shi102241218

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
梯度洗脱就是存在这个问题,真个没被办法,加标吧
2楼2016-09-20 08:44:22
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夜夜笙箫

铁虫 (小有名气)

前一针末到后一针始平衡时间够吗

发自小木虫Android客户端
3楼2016-09-20 10:16:48
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夜夜笙箫

铁虫 (小有名气)

4楼2016-09-20 10:17:50
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fannis

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夜夜笙箫 at 2016-09-20 10:16:48
前一针末到后一针始平衡时间够吗

关键是一直都是等剃度的呀,这个样品是上一步分离下来的,基本上在20-24%乙腈肯定能洗脱,用等度22%洗脱主要是为了样峰之间分离的更明显一点,便于收样。所以应该不存在平衡时间的问题,只要样品全跑出来了就行吧
爱生活爱媳妇儿~
6楼2016-09-20 11:10:18
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fannis

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 夜夜笙箫 at 2016-09-20 10:17:50
相对保留时间一致吗

但是我收样的话,它出峰时间不一致的话,没法收集了都
爱生活爱媳妇儿~
7楼2016-09-20 11:10:53
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夜夜笙箫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by fannis at 2016-09-20 11:10:53
但是我收样的话,它出峰时间不一致的话,没法收集了都...

一直提前?

发自小木虫Android客户端
8楼2016-09-20 12:58:14
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夜夜笙箫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 夜夜笙箫 at 2016-09-20 12:58:14
一直提前?
...

你是双通道走的还是单通道走的呀

发自小木虫Android客户端
9楼2016-09-20 12:59:10
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BTS防弹

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
等梯度是什么意思?你具体的方法能告知一下吗?
10楼2016-09-20 13:44:02
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