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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物目标片段的量特别少，怎么办，求大神们指点！
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小小小玉

禁虫 (小有名气)
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1楼 2016-08-03 18:06:05
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king8366

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-04 06:40:50
xn8008: 应助指数+1 2016-08-04 06:41:22
可以尝试把退火时间延长一下，同时适当增加扩增的循环数，祝你好运

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2楼2016-08-03 21:47:37
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yunsmile2016

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-04 06:40:57
是引物特异性不好吧

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3楼2016-08-03 23:15:03
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zhangyun9346

新虫 (初入文坛)
★ ★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-04 06:41:08
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-04 06:41:15
设计引物时将PCR产物大小的选项调为300-500

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4楼2016-08-03 23:41:50
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ly4524

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-04 22:13:15
看你使用的酶应该是保真性很好的酶吧，我想你是不是需要得到少的错配情况。这种情况，PCR扩增一般是25个循环。介于你的情况，可以使用两步法PCR来增加特异性。

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5楼2016-08-04 08:50:25
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Alice 2016

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议先跑个模板，观察模板的浓度
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怕什么真理无穷，进一寸有一寸的欢喜
6楼2016-08-04 10:52:12
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小小小玉

禁虫 (小有名气)
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7楼2016-08-04 11:43:53
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小小小玉

禁虫 (小有名气)
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8楼2016-08-04 11:45:05
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小小小玉

禁虫 (小有名气)
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9楼2016-08-04 11:46:39
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ly4524

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小小小玉 at 2016-08-04 11:43:53
两步法我没有用过，可以给我说一下吗？
...

我举个例子吧。如果你设计的引物的退火温度是63度。那么你可以尝试将25个循环的前五步用59度退火，后二十步用63度退火。这个温度的选择是需要一定的经验的。

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10楼2016-08-04 16:24:32
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