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18716248350

新虫 (小有名气)

[求助] pet28a表达引物设计问题 已有1人参与

想研究一个蛋白的功能和性质,用pet28a表达,引物设计时目的基因要不要加入起始密码子和终止密码子,选择的是hindIII和EcoR I这两个酶切位点
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6827089

金虫 (正式写手)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-19 15:32:13
你的标签在N端的话就要加终止密码子

发自小木虫Android客户端
2楼2016-07-17 14:01:54
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18716248350

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 6827089 at 2016-07-17 14:01:54
你的标签在N端的话就要加终止密码子

pet28a在两端都有标签,是不是只要一个标签就行了
3楼2016-07-17 14:48:26
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独立卫生间

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以直接用NdeI或NcoI位点中的ATG作为起始密码子,如果是前者应该加上终止密码子,his标签在蛋白N端;如果是后者的话不需要终止密码子,标签在C端。建议使用前者,N端标签对蛋白构象影响较小。如果想用其他酶切位点的话,无法避免引入多余氨基酸,而且必须添加终止密码子和起始密码子!

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-07-21 22:11:00
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