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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒转化大肠杆菌后长出来的全部是载体自连的产物,怎么回事? 已有1人参与

PCR扩增目的片段,然后纯化,连T载体,再把重组的质粒和空载体质粒酶切,纯化、连接,结果长出的克隆挑12个提取质粒,琼脂糖凝胶电泳检测发现条带大小都一样,而且PCR检测都是空载体。。。怎么回事啊,酶切的很完全啊,就算有空载也不至于这么多吧!
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-07-16 11:10:33
连接时增大目的片段的比例,连接体系里载体浓度高就容易自连,还有pcr是用的能加t尾的聚合酶吧?

好的,我再试试!
7楼2016-07-17 11:59:32
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查看全部 8 个回答

y383514131

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-16 07:55:11
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 09:26:49
空载体有相应抗性,肯定可以进入感受态细胞。继续挑吧,我前几天挑了几十个,结果切出相应大小片段,测序却不正确。慢慢挑

发自小木虫IOS客户端
此事说来终觉浅,莫问出处便是真
2楼2016-07-15 23:27:43
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

连接时增大目的片段的比例,连接体系里载体浓度高就容易自连,还有pcr是用的能加t尾的聚合酶吧?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-07-16 11:10:33
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选择远方523

新虫 (初入文坛)

4楼2016-07-16 18:44:23
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