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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助:纯化蛋白，蛋白出现不挂柱现象?
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leland2

新虫 (正式写手)

[求助] 求助:纯化蛋白，蛋白出现不挂柱现象? 已有1人参与

第一:proteinG的柱子，用过四五次，没有出现过这种情况。
第二:上样的过程中，中间出现杂蛋白吸收峰升高，以往也木有出现，当时还以为是样品没有混匀。
第三:western blot检测，流出液中存在目的蛋白。

各种平衡缓冲液，洗脱液都和上一次纯化一样。但是出现蛋白不挂柱的问题。就大神指导原因何在?不胜感激

@biostar2009 @wizardfan @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-07-06 00:16:48
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样流速，还有柱子是否平衡好，等都有影响，是全部流穿，还是部分流穿，若全部流穿估计柱子坏掉了，若部分流穿就好好优化下。比如减低上样速度，柱子好好清洗处理下，在上样，祝顺利
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2楼2016-07-06 14:15:34
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leland2

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-06 14:15:34
上样流速，还有柱子是否平衡好，等都有影响，是全部流穿，还是部分流穿，若全部流穿估计柱子坏掉了，若部分流穿就好好优化下。比如减低上样速度，柱子好好清洗处理下，在上样，祝顺利

是部分蛋白在流穿液中。今天和老师讨论了一下，说明书以及以往前辈实验洗脱是在ph值2.5~3.0之间。我检测了我的洗脱液是3.17。准备降低ph值检测柱子里面是否有蛋白。十分感谢您

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3楼2016-07-06 16:33:18
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
嗯嗯，祝顺利

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4楼2016-07-06 16:59:50
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