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leland2

新虫 (正式写手)

[求助] 求助:纯化蛋白,蛋白出现不挂柱现象? 已有1人参与

第一:proteinG的柱子,用过四五次,没有出现过这种情况。
第二:上样的过程中,中间出现杂蛋白吸收峰升高,以往也木有出现,当时还以为是样品没有混匀。
第三:western blot检测,流出液中存在目的蛋白。

各种平衡缓冲液,洗脱液都和上一次纯化一样。但是出现蛋白不挂柱的问题。就大神指导原因何在?不胜感激

@biostar2009 @wizardfan @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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hc-material

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上样流速,还有柱子是否平衡好,等都有影响,是全部流穿,还是部分流穿,若全部流穿估计柱子坏掉了,若部分流穿就好好优化下。比如减低上样速度,柱子好好清洗处理下,在上样,祝顺利
2楼2016-07-06 14:15:34
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leland2

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-06 14:15:34
上样流速,还有柱子是否平衡好,等都有影响,是全部流穿,还是部分流穿,若全部流穿估计柱子坏掉了,若部分流穿就好好优化下。比如减低上样速度,柱子好好清洗处理下,在上样,祝顺利

是部分蛋白在流穿液中。今天和老师讨论了一下,说明书以及以往前辈实验洗脱是在ph值2.5~3.0之间。我检测了我的洗脱液是3.17。准备降低ph值检测柱子里面是否有蛋白。十分感谢您

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3楼2016-07-06 16:33:18
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

4楼2016-07-06 16:59:50
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