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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR溶解曲线60度到70度之间出现较明显的峰
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[求助] 荧光定量PCR溶解曲线60度到70度之间出现较明显的峰 已有1人参与

本人最近做荧光定量PCR的时候，有几个引物扩增出的结果所对应的溶解曲线显示，除了在80多度出现了目的条带的峰以外，大概在60度到70度之间也出现了较为明显的峰，感觉不太像是引物二聚体的峰，因为引物二聚体的峰所对应的温度大都在70多度这个范围内，想请问一下，这些出现在60度到70度之间的峰有可能是什么峰，是怎么形成的？
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嘻嘻哈哈
1楼 2016-05-10 21:58:14
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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wuhao4850103: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-05-11 14:23:42
有图没？不过听你的描述应该是引物的非特异性扩增导致双峰出现。建议重新设计引物。
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2楼2016-05-11 09:37:12
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-05-11 09:37:12
有图没？不过听你的描述应该是引物的非特异性扩增导致双峰出现。建议重新设计引物。

附件里面的这张图就是其中的一张溶解曲线图，60多度的那个峰不知道是什么。
荧光定量PCR溶解曲线60度到70度之间出现较明显的峰
Melt Curve.jpg
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嘻嘻哈哈
3楼2016-05-11 14:36:50
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solomon7811

新虫 (小有名气)
还是感觉像引物二聚体。另外那个80度的峰也有问题，不对称。

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4楼2016-05-12 06:25:21
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wuhao4850103: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-05-13 16:11:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2016-05-11 14:36:50
附件里面的这张图就是其中的一张溶解曲线图，60多度的那个峰不知道是什么。

Melt Curve.jpg
...

建议还是重新设计引物吧。
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5楼2016-05-12 19:30:00
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jackyoung

新虫 (正式写手)
先普通PCR得出目的条带以后再上定量，我就不多说了。

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CestLaVie
6楼2016-05-13 09:06:58
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