应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 连接在载体上的片段如何判断正反向
131/1返回列表
查看: 3568  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

简简单单-婧

新虫 (小有名气)
已领完
连接在载体上的片段如何判断正反向
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

最近扩了一个基因，连接T载后，送去测序了！结果是正向的，可是我要反向的，除了双酶切鉴定还有其他方法吗？小妹刚刚开始做，还望大神相助！！！

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2016-05-08 00:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

缨络瑾

金虫 (著名写手)
没抢到。。。。

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
7楼2016-05-08 00:30:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rdfu510

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用PCR，选正向引物primer在载体plasmid, 反向引物primer在插入片段即可。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-05-08 00:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zliean

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
载体正向加目的片段反向

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-05-08 09:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
两个办法
1、菌落PCR，上游引物在载体上，下游引物在片段上，如果反向插入，应该PCR不出来，正项插入的PCR条带大小与你的片段差不多；
2、双酶切质粒，一个酶切位点在载体上，一个在片段上（别再中间），根据切下来的大小判断方向。
赞一下 回复此楼
10楼2016-05-08 12:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简简单单-婧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by rdfu510 at 2016-05-08 00:58:23
可以用PCR，选正向引物primer在载体plasmid, 反向引物primer在插入片段即可。

好哒，谢谢！

发自小木虫Android客户端
回复此楼
11楼2016-05-14 00:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简简单单-婧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zliean at 2016-05-08 09:08:44
载体正向加目的片段反向

我回去试试，我之前用载体正向引物加目的片段正向引物，pcr出来结果都有！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
12楼2016-05-14 00:14:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简简单单-婧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-05-08 12:30:51
两个办法
1、菌落PCR，上游引物在载体上，下游引物在片段上，如果反向插入，应该PCR不出来，正项插入的PCR条带大小与你的片段差不多；
2、双酶切质粒，一个酶切位点在载体上，一个在片段上（别再中间），根据切下 ...

好哒，谢谢！我有用菌落pcr，是用载体的正向引物跟片段的正向引物去做，可是结果出来都有！我同时做的载体上的引物有两个是载体自连，所以不懂为什么？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
13楼2016-05-14 00:18:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
长弓氏2楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
goutuizhi3楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
唯我独尊秒杀4楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
立群5楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
scorpiowchy6楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 简简单单-婧 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭