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简简单单-婧

新虫 (小有名气)


已领完
连接在载体上的片段如何判断正反向
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最近扩了一个基因,连接T载后,送去测序了!结果是正向的,可是我要反向的,除了双酶切鉴定还有其他方法吗?小妹刚刚开始做,还望大神相助!!!

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rdfu510

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以用PCR,选正向引物primer在载体plasmid, 反向引物primer在插入片段即可。

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8楼2016-05-08 00:58:23
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缨络瑾

金虫 (著名写手)


7楼2016-05-08 00:30:48
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zliean

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
载体正向加目的片段反向

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9楼2016-05-08 09:08:44
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两个办法
1、菌落PCR,上游引物在载体上,下游引物在片段上,如果反向插入,应该PCR不出来,正项插入的PCR条带大小与你的片段差不多;
2、双酶切质粒,一个酶切位点在载体上,一个在片段上(别再中间),根据切下来的大小判断方向。
10楼2016-05-08 12:30:51
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立群5楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
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长弓氏2楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
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2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
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goutuizhi3楼
2016-05-08 00:29   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
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2016-05-08 00:29   回复  
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