| 查看: 6991 | 回复: 11 | |||
[交流]
单酶切怎么出现了两条带 已有7人参与
|
|||
|
如题，本人研究生菜鸟，正在构建载体，用的载体是将PUC19改造一下的pEntry，就是在Hind3和Ecor1之间加了一个Not1的酶切位点，目的是串联表达盒，现将这个pEntry用Not1和Ecor1酶切回收载体连接用H3和E1酶切得到的PUC-Ubi::mBt片段以及自制的Linker（含有Not1酶切位点及Hind3的粘端），之前也用过这个pEntry的载体，上面只有一个Hind3的酶切位点，linker的Hind3粘端与片段上的Hind3连接以后，就把该位点消除，所以连接后应该只有一个Hind3位点，但我最后用Hind3酶切却出现两条带，已经重复好几次，都是这样的结果，很崩溃，希望路过的大神帮忙看看！万分感谢！ 图中从左到右分别为maker，pEntry-Ubi::mBt被Hind3和Ecor1双酶切、Hind3单酶切、Ecor1单酶切、Hind3和Not1双酶切以及质粒的电泳图，酶没有被污染。  .jpg.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有58人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有12人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因敲除中双交换问题
已经有0人回复
- 酶切二次回收后DNA弥散，怎么回事
已经有1人回复
- 连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。
已经有2人回复
- 单酶切后出现两条距离很近的条带
已经有2人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- 点突变pcr后跑琼脂糖凝胶电泳发现条带不对，请高手指点！！！
已经有1人回复
- 质粒单酶切出现两条带
已经有18人回复
- 【求助/交流】重组子酶切验证很奇怪
已经有4人回复
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-23 07:18:04
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-23 07:18:04
|
很简单，环状载体比线性载体跑的快，切开了不就变线性了嘛，证明载体还没有完全切完呗 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-22 22:25:37
sheepshowzz
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 109.7
- 红花: 2
- 帖子: 38
- 在线: 11.5小时
- 虫号: 3880954
- 注册: 2015-05-20
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
????????}????????N????HindIII??????? ????lane 2?????@HindIII??_??????λ?c, ??????h????_?JpEntry?d?w?????????HindIII??λ? ???????????O????????????}? ????????С???????A??? ????????????????@?????????"pEntry??Not1??Ecor1??л?????????????H3??E1??е????PUC-Ubi::mBt???????????Linker??????Not1???λ??Hind3??????" ???O??????d?wpEntry???@???N??λ: -----HindIII-NotI-EcoRI----- Vector?? 2+3 insert A?? (HindIII)+3 insert B?? 2+(HindIII) ???????????@??, ????3 way ligation???, ????????-----HindIII-NotI-(insert B-HindIII-insert A)-EcoRI----- ??????????HindIII?]?e??XD |
9楼2016-03-24 13:17:21
张力民1598
铜虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1160.7
- 红花: 2
- 帖子: 246
- 在线: 33.4小时
- 虫号: 664421
- 注册: 2008-11-29
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2016-03-23 00:14:39
4楼2016-03-23 10:00:30
5楼2016-03-23 10:02:57
6楼2016-03-23 13:05:01
7楼2016-03-23 14:53:01
8楼2016-03-24 09:54:57
10楼2016-03-24 14:19:52
5
