| 查看: 3217 | 回复: 0 | ||
[求助]
基因敲除中双交换问题
|
|
大家好： 最近做一个菌的敲除，用的自杀质粒介导。单交换已经证明了质粒整合。双交换通过SceI酶切割引发重组。推测PCR检测会有三种情况，（1）仍为单交换，检测为大小两条带（2）敲除菌， 检测为小带（3）恢复到野生型，检测大带。 PCR结果发现，绝大部分为（1）情况。有少数是（2）情况。为了确认，对（2）再一次进行重复验证，又都变成了（1）的情况了。分析原因，a. SceI表达量低导致酶活不够，切割能力差。b. 可能已经出现敲除子，（2）情况的克隆不太纯。c. PCR扩增有些问题。不知道哪里的问题，向大家请教一下。在二次交换是需要注意什么，需要怎么筛选。谢谢  |
回复此楼» 猜你喜欢
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
同事接到电话了，我却没有
已经有4人回复
-
准备明年的基金了
已经有5人回复
-
今年的WR进展到哪一步了？
已经有6人回复
-
这种情况还有戏吗
已经有8人回复
-
时间戳他又来了
已经有11人回复
