24小时热门版块排行榜

返回列表

wangyinyuea

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 22
帖子: 12
在线: 4.5小时
虫号: 2111200
注册: 2012-11-06
专业: 生物化学

[交流] 单酶切怎么出现了两条带已有7人参与

如题，本人研究生菜鸟，正在构建载体，用的载体是将PUC19改造一下的pEntry，就是在Hind3和Ecor1之间加了一个Not1的酶切位点，目的是串联表达盒，现将这个pEntry用Not1和Ecor1酶切回收载体连接用H3和E1酶切得到的PUC-Ubi::mBt片段以及自制的Linker（含有Not1酶切位点及Hind3的粘端），之前也用过这个pEntry的载体，上面只有一个Hind3的酶切位点，linker的Hind3粘端与片段上的Hind3连接以后，就把该位点消除，所以连接后应该只有一个Hind3位点，但我最后用Hind3酶切却出现两条带，已经重复好几次，都是这样的结果，很崩溃，希望路过的大神帮忙看看！万分感谢！
图中从左到右分别为maker，pEntry-Ubi::mBt被Hind3和Ecor1双酶切、Hind3单酶切、Ecor1单酶切、Hind3和Not1双酶切以及质粒的电泳图，酶没有被污染。

.jpg.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

基因敲除中双交换问题已经有0人回复
酶切二次回收后DNA弥散，怎么回事已经有1人回复
连接、转化，在平板上长出来的不是单菌落，是一层菌膜，根本没有单菌落。已经有2人回复
单酶切后出现两条距离很近的条带已经有2人回复
提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了已经有18人回复
点突变pcr后跑琼脂糖凝胶电泳发现条带不对，请高手指点！！！已经有1人回复
质粒单酶切出现两条带已经有18人回复
【求助/交流】重组子酶切验证很奇怪已经有4人回复

1楼 2016-03-22 20:26:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

舒传

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1307.9
帖子: 59
在线: 54.1小时
虫号: 2458658
注册: 2013-05-10
专业: 基因表达调控与表观遗传学

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-23 07:18:04

很简单，环状载体比线性载体跑的快，切开了不就变线性了嘛，证明载体还没有完全切完呗

发自小木虫Android客户端

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2016-03-22 22:25:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sheepshowzz

铜虫 (初入文坛)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 109.7
红花: 2
帖子: 38
在线: 11.5小时
虫号: 3880954
注册: 2015-05-20
性别: GG
专业: 细胞增殖、生长与分化

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

????????}????????N????HindIII???????
????lane 2?????@HindIII??_??????λ?c, ??????h????_?JpEntry?d?w?????????HindIII??λ?
???????????O????????????}? ????????С???????A???

????????????????@?????????"pEntry??Not1??Ecor1??л?????????????H3??E1??е????PUC-Ubi::mBt???????????Linker??????Not1???λ??Hind3??????"
???O??????d?wpEntry???@???N??λ: -----HindIII-NotI-EcoRI-----
Vector?? 2+3
insert A?? (HindIII)+3
insert B?? 2+(HindIII)
???????????@??, ????3 way ligation???, ????????-----HindIII-NotI-(insert B-HindIII-insert A)-EcoRI-----
??????????HindIII?]?e??XD

赞一下(1人)

回复此楼

abcdogbitepig