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wangyinyuea

新虫 (初入文坛)

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[交流] 单酶切怎么出现了两条带已有7人参与

如题，本人研究生菜鸟，正在构建载体，用的载体是将PUC19改造一下的pEntry，就是在Hind3和Ecor1之间加了一个Not1的酶切位点，目的是串联表达盒，现将这个pEntry用Not1和Ecor1酶切回收载体连接用H3和E1酶切得到的PUC-Ubi::mBt片段以及自制的Linker（含有Not1酶切位点及Hind3的粘端），之前也用过这个pEntry的载体，上面只有一个Hind3的酶切位点，linker的Hind3粘端与片段上的Hind3连接以后，就把该位点消除，所以连接后应该只有一个Hind3位点，但我最后用Hind3酶切却出现两条带，已经重复好几次，都是这样的结果，很崩溃，希望路过的大神帮忙看看！万分感谢！
图中从左到右分别为maker，pEntry-Ubi::mBt被Hind3和Ecor1双酶切、Hind3单酶切、Ecor1单酶切、Hind3和Not1双酶切以及质粒的电泳图，酶没有被污染。

.jpg.jpg

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1楼 2016-03-22 20:26:29

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舒传

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-23 07:18:04

很简单，环状载体比线性载体跑的快，切开了不就变线性了嘛，证明载体还没有完全切完呗

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2楼2016-03-22 22:25:37

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sheepshowzz

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