使用pGEX-4T-1载体表达蛋白,在未加IPTG与加IPTG诱导组无差异,然后换了pET-28a载体,同样也出现这种奇怪的现象,已经困扰很久了,百思不得其解,望各位大佬指点迷津,小女子不甚感激。 返回小木虫查看更多
这个没有背景介绍,无法分析
这种情况还是比较少见的,因为你说的载体还是比较常见的,相比pGEX,pet还是有一些不同的,我想问一下,你采用化转的时候,转化子是不是非常多?
这个没有背景介绍,无法分析
这种情况还是比较少见的,因为你说的载体还是比较常见的,相比pGEX,pet还是有一些不同的,我想问一下,你采用化转的时候,转化子是不是非常多?
结果一样有两种情况,第一种是有表达,第二种是没表达。代表的问题是不一样的。首先要确认是否存在表达。从你的情况我感觉是没有表达,质粒构建正确是第一步,其中你要确认读码框是正确读码的,这很重要。其次要看是否存在稀有密码子。以上2点要确认好。质粒构建和转化都很容易,但转化子不要特别多,我之前的一个项目就是这个问题导致的假阴性
,