更改酶切位点进行PCR，然后将PCR产物与载体骨架进行连接，获得改变了酶切位点的载体：
有两个问题：以XbaI 为例，酶切位点在CTCGAG的C和T之间，更改酶切点的的时候，是只在引物一段加上“TCGAG”还是要加上“CTCGAG”，即要不要加酶切位点之前的碱基C？如果是要加C，是不是要对PCR产物进行酶切，才能获得切开的粘性末端？如果不加C，PCR产物是完整的双链结构，怎么才能获得粘性末端？
另外，听实验室有人说可以用PCR产物直接连接，请问直接连接是什么意思，就是说，PCR产物直接与酶切的载体骨架进行连接吗，不需要上面说的酶切？那PCR产物是要电泳后回收吗，还是直接用PCR以后的溶液（不含有Loading Buffer）就可以？@biostar2009@youlinglyw@wizardfan 返回小木虫查看更多