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审稿意见让补 in vitro kinase assays，是什么呀，求指点

作者 nvwangzzh: 来源: 小木虫 350 7 举报帖子

There should be in vitro kinase assays performed to examine the inhibitory activities of convallatoxin on JAKs, Src, and PI3K. 返回小木虫查看更多

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精华评论

songcumt

这个意见不是很明白了吗？让你补充个实验，检测convallatoxin对JAK、Src和PI3K的抑制作用。
nvwangzzh

引用回帖:
2楼: Originally posted by songcumt at 2019-11-07 18:02:55
这个意见不是很明白了吗？让你补充个实验，检测convallatoxin对JAK、Src和PI3K的抑制作用。

我都通过蛋白免疫印迹测了啊。我不明白还需要补什么实验，求指点
songcumt

引用回帖:
3楼: Originally posted by nvwangzzh at 2019-11-07 18:18:05
我都通过蛋白免疫印迹测了啊。我不明白还需要补什么实验，求指点...

对你这个不是很了解，你这个蛋白免疫印迹测试是他想表达的意思？
zsw2366

in vitro kinase assay 是指在体外条件下（适当的缓冲体系），采用1.重组的激酶(JAKs, Src, and PI3K.)与这些激酶适当的2.蛋白底物，加上放射性标记ATP[磷32]，在无或者有抑制剂的条件下孵育一段时间之后，跑蛋白电泳。将跑完电泳的胶，与X光片共同孵育一段时间，几天到一周不等。如果你的蛋白底物发生磷酸化，则被P32标记，在该底物分子量的位置，将会有放射性自显影条带。如果你的抑制剂起作用的话，响应条带的强弱将降低。
nvwangzzh

引用回帖:
5楼: Originally posted by zsw2366 at 2019-11-21 20:00:02
in vitro kinase assay 是指在体外条件下（适当的缓冲体系），采用1.重组的激酶(JAKs, Src, and PI3K.)与这些激酶适当的2.蛋白底物，加上放射性标记ATP，在无或者有抑制剂的条件下孵育一段时间之后，跑蛋白电泳。将 ...

谢谢您
，
wangying24

现在都用酶标仪检测更方便，对酶标仪的要求还是挺高的
单曲循环mwp

蛋白沉默一下