本人实验新手，满怀憧憬的开始研究僧生涯，师姐给了几管BV-2 小胶质细胞和rmc-1 muller细胞系，欣喜~，想着先传代扩增后再慢慢做后续实验。两株都是P10代，一直保存在实验室的液氮罐中，中途未进行任何路途转移。小心翼翼拿到手后，37℃水浴锅快速解冻，做了两次复苏（1次直接抽取出在15ml管离心，第二次用了培养液1:1中和后再做的离心）。每天换液。

离心参数：22℃，1000r/s，5min

配置的培养液：DMEM 4.5 89%+ PBS 10% +PS双抗1%

第一批复苏细胞，第1、2天查看，形态好，贴壁可，到了第3天BV-2，rmc-1细胞形态，结构全不清晰，培养液成泥沙样混浊，换完液后第2天继续混浊，考虑被污染，立即丢弃。

第二批复苏的细胞，不足是在细胞复苏时，细胞离心后未充分吹散，有少许的35成群的成团。不过第1天查看细胞rmc-1形态，贴壁状态都很好; BV-2几乎全漂浮，没什么贴壁细胞。（此前想着细胞还好，就没拍照）。

到了第2天，rmc-1全部细胞成崩解状态形态，结构破坏。BV-2苟延残喘的留了个数级的几个细胞。(今天拍了照，如下）


这么离奇的细胞死亡，自己经验又不够，不知道是细胞本身不好？还是操作或培养条件问题？，也不知道如何一一排查，只能求助各位大佬不吝解答---分析可能原因及排查解决方法？？？~~~
无以回报，唯有家当金币重谢~~~~


BV-2 1.jpg



rmc-1 2.jpg



rmc-1 3.jpg 返回小木虫查看更多