构建载体目的基因一直P不出来?求大佬支援
目的基因的片段不长,分别450bp和660bp,模版确定没问题(师兄用该模版能p出来),最开始用CDS序列在Primer5设计的加了酶切位点的引物,没P出来;后来,师兄建议2p,又设计了不加酶切位点的引物,有条带,回收测序后,不对;又在CDS 5’UTR和3’UTR延伸了一段序列,设计了引物同样没加酶切位点,完全没条带。现在不知道怎么办了……各位大佬给提提意见
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目的基因的片段不长,分别450bp和660bp,模版确定没问题(师兄用该模版能p出来),最开始用CDS序列在Primer5设计的加了酶切位点的引物,没P出来;后来,师兄建议2p,又设计了不加酶切位点的引物,有条带,回收测序后,不对;又在CDS 5’UTR和3’UTR延伸了一段序列,设计了引物同样没加酶切位点,完全没条带。现在不知道怎么办了……各位大佬给提提意见
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检测下该基因在该模板里的表达量
检测基因的表达应该是RT -PCR 或者qpcr
,
直接合成