拉长时间是没用的啊。改变液相。

如果是反相的话，请增加水溶液的比例。

把

降低流速，改变温度，改变流动相比例，梯度或等度，更换柱效高的柱子，这些是常用的解决分离度不好的思路

，

是蛋白么，如果是蛋白可以源头换柱子，否则就要摸条件，就怕前面分开了，后面分不开了