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又是双酶切的问题

作者 junxiao0320
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
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用pQE30双酶切加入目的片段,酶切位点(sPHI,Sal1)用NEB的HF,切了30分钟
是三个单菌落,出啦好多条带,怎么回事啊,我的目的片段504,我的载体3800左右(因为已经有一个片段了)。marker为:5000,3000,2000,1000,750,500,250,100.
我就剩一个怀疑的问题了:我构建这个质粒的时候,没有导入DH5α,导在了全式金公司的:Trans1-T1 Phage Resistant chemically Competent Cell
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  • 精华评论
  • wlwsnoopy

    载体是不是也有这些酶切位点。。。。
    三个菌落切的还不一样,是不是污染了。。。

  • junxiao0320

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by wlwsnoopy at 2012-03-18 21:37:02:
    载体是不是也有这些酶切位点。。。。
    三个菌落切的还不一样,是不是污染了。。。

    质粒提完,就酶切了啊
    就是照片中前面的质�
    ,

  • junxiao0320

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by junxiao0320 at 2012-03-19 13:13:01:
    质粒提完,就酶切了啊
    就是照片中前面的质粒

    ,没有遇到过的吗?非常期待您的回复

  • junxiao0320

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by wlwsnoopy at 2012-03-18 21:37:02:
    载体是不是也有这些酶切位点。。。。
    三个菌落切的还不一样,是不是污染了。。。

    载体污染啦,?会是哪个环节污染呢?

  • 潇灵玉雪

    您好  我也想做一下双酶切,而且我想要的是你这种图,你可以把你的体系告诉我一下吗?另外,你用的那两种酶是怎样进行筛选的?

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