用pMD-18T simple 双向测序，PCR验证有条带，结果却是空质粒
我现在要用16SrDNA做菌种鉴定
16SrDNA用通用引物PCR出来了，然后链接到Takara的pMD-18T simple 载体。
转入DH5α，蓝白斑筛选，扩增，提质粒，质粒PCR验证都没问题。
送华大基因做双向测序，测序结果拼接后，结果没有目的序列，blast显示是空质粒。可能是什么原因？
注：本来应想用pMD-18T 载体的，当时用完了，就用的simple载体。没进行双酶切、单酶切验证，只能做PCR验证。对实验结果影响大吗？
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京公网安备 11010802022153号
赡茉颍耗０逦廴玖耍ㄒ�/PCR缓冲液等被模板污染了），建议做阴性对照（用水或缓冲液做模板，如果也能P出，说明污染了模板）。
同时建议做双酶切鉴定，双酶切加PCR鉴定都没问题的话，一般就表明连上了。
祝：实验顺利
，
我没用过你说的pMD-18T simple 载体
如果上面有通用引物，也可以用通用引物PCR鉴定下，这样可以排除污染。