求助怎样选择毛细管电泳正负极性高压盒
在进行样品分析时,什么情况下选择正极性高压盒,什么情况下选择负极性高压盒
我曾经用3-吲哚乙酸,苯甲酸等作为背景电介质利用间接紫外法对糖类物质进行分析,使用正极性高压盒就是不出来峰,但使用负极性高压盒出来峰了,PH=13左右,请楼下的帮忙分析一下原因
[ Last edited by wsb9696 on 2009-1-8 at 11:31 ]
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在进行样品分析时,什么情况下选择正极性高压盒,什么情况下选择负极性高压盒
我曾经用3-吲哚乙酸,苯甲酸等作为背景电介质利用间接紫外法对糖类物质进行分析,使用正极性高压盒就是不出来峰,但使用负极性高压盒出来峰了,PH=13左右,请楼下的帮忙分析一下原因
[ Last edited by wsb9696 on 2009-1-8 at 11:31 ]
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一般情况下,使用的裸管,就直接使用正极性,就是阳极在进样端,因为EOF是从阳极到阴极。
如果管壁进行了修饰而带上了正电荷,或者溶液中含有较高的浓度的带正电的表面活性剂或聚合物,如CTAB,DDAB,PDDA,PEI,离子液体等等,此时EOF方向是从阴极到阳极,所以你需要使用负极性高压,也就是将阴极置于进样端。
在缓冲中添加高浓度的3-吲哚乙酸是有可能引起eof反向的。在pH13的条件下,3-吲哚乙酸的吲哚基五元环上的季胺完全电离而使五元环带上正电荷,从而吸附在带负电的管壁使eof反向。具体的情况类似于咪唑离子液体使eof反向的情况。
但是具体情况还需要具体分析,你需要把具体的缓冲组成说出来
从你的缓冲组成来看,应该pH不会是12.8,应该是吲哚乙酸钠吧
是的,用氢氧化钠调pH至12.8,
lz要检测的东西是负离子还是正离子啊?倘若检测的是负离子,在高pH条件下,电渗流比较大,可能比离子淌度高一个数量级,用正向电压,若在较低pH条件下,电渗流接近于零的,肯定要用反压,不然检测的物质就不出峰了。正离子就相反。
不过电渗的增大和减小和管径也有一定关系,有文献上说75um的管里的电渗,随着pH的提高,先增大后减小了。
阳离子表面活性剂加进去可以改变电渗方向,不过是有个临界浓度的吧,加的太少效果就不一定了。
[ Last edited by cpn on 2009-4-29 at 23:40 ],
呵呵,我最近也在做糖的毛细管电泳分析,不过用的直接紫外检测,通过把糖衍生的方法使之带上具紫外吸收的基团。不过有些手性异构体分不开了,正在头疼中。。。