我的目标序列（两三百bp）GC含量高达70%，用一般的Taq扩不出条带，后面改进了，试了好几种酶但总出现非特异性条带，看了赛默飞和Takara的高GCbuffer高保真的酶，但种类太多不知道选那一款...

构建过表达载体，现在准备目的基因，我RNA提完，现在扩CDNA,可以买一个CDNA第一条链合成的试剂盒，然后用塔卡拉GCbuffer带的pcr体系扩增CDNA吗

引物和质粒都准备好后，当然就是做PCR喽，不过对于PCR的酶和buffer，不能用平时的，我们做PCR把整个质粒扩出来，延伸长度达到几个K，所以要用那些GCbuffer或扩增长片段的buffer，另外，要用...

引物GC含量较高，用GCbuffer可不可以代替pcrbuffer

启动子序列GC%平均在30%-40%，用phusion酶中的GCbuffer，引物保证没有问题，不知道这是什么原因引起的，不知有没有虫友遇到过这种事情。有没有解决这种问题的方法，（到提供实用建议的，可...

想请教个问题，就是我用GCbuffer和LAtaqbuffer扩增同样的东西结果出来的条带不一致是为什么？LAbuffer的结果是带特别多，而GC的结果是比较干净,烦请各位多多指教哈，我该相信哪种结果？非常...

用过GCbuffer，出现许多非特异性条带，分成两段扩过，后面一段扩出来了，前面的一段扩不出来。由于是要构建载体用的，已经加了酶切识别的引物接头，扩了好多天了，试过两步法：95°5min，95...

本人新手，最近扩增一段500bp的片段，GC含量70％，用了GCbuffer但是条带很弱，达不到测序标准，求助各位大神？这种情况该怎么办？

大侠好，我dsRNA加接头以后，放在-20℃，大概4天，...5pcr时用的是mix（dNTP，酶），而不是高保真的酶和GCBuffer，这会是原因么？先谢谢各位大侠~15.4.12，反转录PCR后，M_副本_副本_副本.jpg

最近一直在做甲基化的PCR，一直没法获得扩增的条带，模板用的是qiagen的试剂盒处理后的DNA，PCR是25ul的体系，用的宝生物的GCbuffer和LAtaq酶。反应条件95度5min，然后开始循环，95度30s，...

加了酶切位点和保护碱基后tm值增加了30度，本身引物就50度了，而且长度很短15bp左右，做过各种梯度和分布PCR，P出来的时候很少很少，加了GCbuffer或者DMSO后也没P出来，跑胶都是非特性性条...

克隆的基因GC含量达到70%，然而用GCbuffer和ETaq酶时不出条带，用了ETaqbuffer和ETaq酶时反而有条带，好像还不是单引物出的条带，因为我提高温度后条带更亮了，我觉着好奇怪埃哥哥姐姐们...

亲们，我是一个研一的新手，现在做分子生物学方面的，正在根据转录组测序的结果克隆基因，现在有一个问题想问一下，Etaq酶可以与GCbuffer合用吗，谢谢大家

请路过的虫友大神们看看，我的片段是2.3kb的，GC含量是59.61%，所以就没用GCbuffer。所用PCR体系25ul,10*transtartbuffer2.5ultranstartTaqase0.5uldNTPs1ulprimer11ulprimer1ulcDNA2uldd水...

前后做了两次PCR，退火温度为62°和63°，跑了24hours以上，对mg2+、模板、高GCbuffer都进行了梯度实验，最后出来跑胶都没有结果，除了几个较暗的大范围弥散条带。请问大家，还有什么因素是...

试过以前剩下的phusion，kapa，pfu和taq的buffer，发现phusion和kapa的buffer都可以用，有没有哪位大侠知道phusion或者kapa的缓冲液成分（尤其是那个GCbuffer）啊？谢谢啦

引物序列在blast出了病毒的全序列了，csfv猪瘟病毒porv猪轮状病毒都是rna我的体系是12.5onestep6water0.5es酶（缩写）2上下游引物4模板，prv伪狂犬dna病毒我用的是20water15gcbuffer2dntp2...

2、GCbuffer与一般的buffer主要区别是什么，还有，一般什么情况下选择GCbuffer？由于没有师兄师姐做这方面的，所以很多都不懂。3、PCR中延长时间过长会有什么后果？希望各位前辈指点啊，...

巢式PCR最开始的时候均用10×Buffer跑PCR，做了很多有极少的条带被扩增出来了后来换用：第一次PCR用GCBuffer1，第二次仍然用10×Buffer，有一半的条带被扩增出来（相同条件条带明显更加明亮...

大家好，我现在克隆一组目的片段，以cDNA为模板，片段大小2kbp左右，GC含量均超过60%，实验做了2个多月，没有进展，很是苦恼主要用的大连宝生物的la酶和GCbuffer我在网上搜过，高GC含量片段...

用过的PCR方法有常规-，长距离-，多重-PCR，使用过高GCbuffer，调整过引物、模板浓度和酶的用量，重新设计了引物，Takara的genomewalkingkit也尝试过了。是不是还有哪些方面可以改进，或者...

大赏金币求GCbuffer配方：有没有谁知道GCbuffer的配方之前一直在用takara的现在发现用不起了在继续用就要烧更多的钱了不想给日本人继续赚钱了故想在这里求配方不方便公开的可以私聊我可以...

我的体系如下：第一轮为25μL体系，其中gDNA30ng左右，dNTP200μM，GCbuffer12.5μL，primer0.15μM,随机引物为1μM。第一轮的图如下：1kb第二轮为25μL体系，其中包括将第一轮产物稀释50倍...

扩一个基因，1314bp，GC...95℃5min95℃45s58、63℃45s72℃1min30s72℃10min4℃hold28个循环扩了三次没有扩出来GC含量高，一会准备换个GCbuffer，但是师姐说那个没有什么用处。请教各位大侠~

最近扩增一个基因碰到了困难...做过温度梯度（56度到62度），用过GCbuffer，也改变镁离子浓度（2.5mM）,用过某公司的SuperTaq，也用过罗氏的扩增长片段的酶，都无能无力。请各位帮忙了，谢谢！