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ch854355011

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE蛋白表达 已有7人参与

最近原核表达SDS-PAGE一直没结果。也不知道出现了什么问题。原核表达载体是pet28a,菌BL21,培养基LB,经菌液pcr,酶切和测序,表明重组质粒构建成功,诱导浓度1mmol/L,取样0-5h,但是每次跑出来的条带都一样,没有所需目的条带的表达,目的基因在27或33kd,跑出来的图片每次都没表达,并且条带深浅度一样。求助给点意见。

SDS-PAGE蛋白表达
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wangpeng8

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是诱导时间太短了,我们实验室诱导的时间在8小时左右,条件是在低温,如果是在37度,一般诱导3个小时
且行且珍惜!
3楼2016-01-26 19:54:22
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查看全部 14 个回答

梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

是不是有包含体,破碎一下试试?

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-26 19:53:25
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原海亮

木虫 (著名写手)

你这个是全细胞加热后跑的么,还是细胞超声后跑的上清?建议沉淀也跑一下,看看目的蛋白是不是在沉淀包涵体中。另外不知道你诱导温度,一般低温过夜诱导较好,可以做诱导温度优化。还有iptg诱导浓度可以适当降低些

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-01-26 20:55:00
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tj113578888

金虫 (小有名气)

最好跑个空载做对照,这样更能看出是否有目的条带,还有诱导时间增长

发自小木虫Android客户端
不求事事顺心,但求问心无愧
5楼2016-01-26 21:10:19
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