24小时热门版块排行榜    

查看: 3141  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ch854355011

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE蛋白表达 已有7人参与

最近原核表达SDS-PAGE一直没结果。也不知道出现了什么问题。原核表达载体是pet28a,菌BL21,培养基LB,经菌液pcr,酶切和测序,表明重组质粒构建成功,诱导浓度1mmol/L,取样0-5h,但是每次跑出来的条带都一样,没有所需目的条带的表达,目的基因在27或33kd,跑出来的图片每次都没表达,并且条带深浅度一样。求助给点意见。

SDS-PAGE蛋白表达
`~~~4[GB2GK@Q)LEVF_[JU0.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tj113578888

金虫 (小有名气)

最好跑个空载做对照,这样更能看出是否有目的条带,还有诱导时间增长

发自小木虫Android客户端
不求事事顺心,但求问心无愧
5楼2016-01-26 21:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

是不是有包含体,破碎一下试试?

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-26 19:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng8

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是诱导时间太短了,我们实验室诱导的时间在8小时左右,条件是在低温,如果是在37度,一般诱导3个小时
且行且珍惜!
3楼2016-01-26 19:54:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

你这个是全细胞加热后跑的么,还是细胞超声后跑的上清?建议沉淀也跑一下,看看目的蛋白是不是在沉淀包涵体中。另外不知道你诱导温度,一般低温过夜诱导较好,可以做诱导温度优化。还有iptg诱导浓度可以适当降低些

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-01-26 20:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +3 gdlf9999 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:08 by 搏击518
[考研] 299求调剂 +5 某某某某位 2026-03-21 5/250 2026-03-23 23:36 by 热情沙漠
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +3 SYA! 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 招08考数学 +6 laoshidan 2026-03-20 14/700 2026-03-23 14:37 by 15614359529
[考研] 求调剂材料学硕080500,总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
信息提示
请填处理意见