| 查看: 2392 | 回复: 20 | ||
[求助]
用挂着酶切位点的引物跑PCR结果跑不出来啊！小白求救啊！ 已有4人参与
|
|
要做HEK293表达一种GPCR，然后老板让我试试直接用挂着酶切微店的引物跑PCR，已经试了9次了，一直不成功。 引物： F： GCC 酶切位点 序列前端25bp R： 序列末端25bp 酶切位点 CCG 片段长是2078bp, ORF 1688bp 用的LA Taq. PCR 程序试过很多种，推荐的2 step 和正常的3step， 还有各种退火温度都试过了。 也试过用PCR产物为模板再跑一次PCR了,就是看不到条带啊。 其中有一次看到条带了，结果小于1600bp. 已经耽误了好多天了，求救啊师兄师姐们， 研一的小白要疯掉了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有85人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 打算在N端加His标签，求个人帮着看看引物设计~急啊
已经有8人回复
- 生物学软件介绍及其下载地址【学生物的会很有用】
已经有24人回复
leisure797
铁杆木虫 (职业作家)
百里登风
- 应助: 568 (博士)
- 金币: 6771
- 散金: 20
- 红花: 32
- 沙发: 33
- 帖子: 4070
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 757369
- 注册: 2009-04-25
- 专业: 土壤生态学
2楼2016-01-25 10:19:31
3楼2016-01-25 10:47:57
4楼2016-01-25 20:25:09
noblefire
铁虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 2325.7
- 帖子: 104
- 在线: 30.5小时
- 虫号: 4371453
- 注册: 2016-01-21
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
gpcr是真核的基因，你用的模板是cDNA么？可能是模板的问题，因为用cDNA一般很容易扩增。你用的酶几乎是最好的了，虽然大材小用了。 实在不行先设计一段500bp的片段(介于你的酶比引物贵多了)，扩增一下看看模板有没有问题。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-01-25 21:08:20
noblefire
铁虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 2325.7
- 帖子: 104
- 在线: 30.5小时
- 虫号: 4371453
- 注册: 2016-01-21
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
6楼2016-01-25 21:10:15
7楼2016-01-25 23:46:57
zhufadi
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1299.3
- 散金: 18
- 红花: 2
- 帖子: 404
- 在线: 67.4小时
- 虫号: 1072547
- 注册: 2010-08-10
- 性别: MM
- 专业: 植物化学保护
8楼2016-01-25 23:51:44
9楼2016-01-26 00:21:25
jiangzz555
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 413.7
- 红花: 1
- 帖子: 74
- 在线: 140.8小时
- 虫号: 3120507
- 注册: 2014-04-08
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
10楼2016-01-26 01:21:14