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用挂着酶切位点的引物跑PCR结果跑不出来啊！小白求救啊！ 已有4人参与
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要做HEK293表达一种GPCR，然后老板让我试试直接用挂着酶切微店的引物跑PCR，已经试了9次了，一直不成功。 引物： F： GCC 酶切位点 序列前端25bp R： 序列末端25bp 酶切位点 CCG 片段长是2078bp, ORF 1688bp 用的LA Taq. PCR 程序试过很多种，推荐的2 step 和正常的3step， 还有各种退火温度都试过了。 也试过用PCR产物为模板再跑一次PCR了,就是看不到条带啊。 其中有一次看到条带了，结果小于1600bp. 已经耽误了好多天了，求救啊师兄师姐们， 研一的小白要疯掉了。 |
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