| 查看: 2830 | 回复: 20 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
用挂着酶切位点的引物跑PCR结果跑不出来啊！小白求救啊！ 已有4人参与
|
||
|
要做HEK293表达一种GPCR，然后老板让我试试直接用挂着酶切微店的引物跑PCR，已经试了9次了，一直不成功。 引物： F： GCC 酶切位点 序列前端25bp R： 序列末端25bp 酶切位点 CCG 片段长是2078bp, ORF 1688bp 用的LA Taq. PCR 程序试过很多种，推荐的2 step 和正常的3step， 还有各种退火温度都试过了。 也试过用PCR产物为模板再跑一次PCR了,就是看不到条带啊。 其中有一次看到条带了，结果小于1600bp. 已经耽误了好多天了，求救啊师兄师姐们， 研一的小白要疯掉了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有107人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 打算在N端加His标签，求个人帮着看看引物设计~急啊
已经有8人回复
- 生物学软件介绍及其下载地址【学生物的会很有用】
已经有24人回复
3楼2016-01-25 10:47:57
leisure797
铁杆木虫 (职业作家)
百里登风
- 应助: 568 (博士)
- 金币: 6771
- 散金: 20
- 红花: 32
- 沙发: 33
- 帖子: 4070
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 757369
- 注册: 2009-04-25
- 专业: 土壤生态学
2楼2016-01-25 10:19:31
4楼2016-01-25 20:25:09
noblefire
铁虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 2325.7
- 帖子: 105
- 在线: 30.6小时
- 虫号: 4371453
- 注册: 2016-01-21
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
gpcr是真核的基因，你用的模板是cDNA么？可能是模板的问题，因为用cDNA一般很容易扩增。你用的酶几乎是最好的了，虽然大材小用了。 实在不行先设计一段500bp的片段(介于你的酶比引物贵多了)，扩增一下看看模板有没有问题。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-01-25 21:08:20
100