应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用挂着酶切位点的引物跑PCR结果跑不出来啊！小白求救啊！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2496  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Ritaaaaaa

新虫 (初入文坛)

[求助] 用挂着酶切位点的引物跑PCR结果跑不出来啊！小白求救啊！ 已有4人参与

要做HEK293表达一种GPCR，然后老板让我试试直接用挂着酶切微店的引物跑PCR，已经试了9次了，一直不成功。
引物： F： GCC 酶切位点 序列前端25bp
          R： 序列末端25bp 酶切位点 CCG

片段长是2078bp, ORF 1688bp
用的LA Taq.  PCR 程序试过很多种，推荐的2 step 和正常的3step， 还有各种退火温度都试过了。
也试过用PCR产物为模板再跑一次PCR了,就是看不到条带啊。
其中有一次看到条带了，结果小于1600bp.

已经耽误了好多天了，求救啊师兄师姐们，
研一的小白要疯掉了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-25 09:55:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhufadi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的r引物出问题了，把酶切位点挂r引物的5,端吧，拿着引物问问实验室的师兄师姐们去吧！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
世上无难事，只怕有心人！
8楼2016-01-25 23:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

leisure797

铁杆木虫 (职业作家)

百里登风

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
友情支持：高保真的酶，takara 的pyrobest，Thermo的Phusion，还有FastPfu
赞一下 回复此楼
笑一个！
2楼2016-01-25 10:19:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王世玉

新虫 (初入文坛)
可以换一下酶试试
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-25 10:47:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ritaaaaaa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by leisure797 at 2016-01-25 10:19:31
友情支持：高保真的酶，takara 的pyrobest，Thermo的Phusion，还有FastPfu

实验室都不用这些欸。下午换了KOD-plus酶，还是没有条带。TnT
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-25 20:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +7 YYYYYNNNNN 2026-03-26 9/450 2026-03-30 20:29 by YYYYYNNNNN
[考研] 材料专硕调剂 +11 椰椰。 2026-03-29 11/550 2026-03-30 16:21 by wangjy2002
[考研] 283求调剂（080500） +14 A child 2026-03-27 14/700 2026-03-30 12:06 by 探123
[考研] 0856求调剂 +8 楒桉 2026-03-28 8/400 2026-03-30 10:00 by wzy-lxz
[考研] 317求调剂 +10 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 10/500 2026-03-30 09:45 by longlotian
[考研] 求调剂 +4 QiMing7 2026-03-25 5/250 2026-03-29 21:10 by 唐沐儿
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +8 柳溪边 2026-03-26 8/400 2026-03-29 20:42 by 唐沐儿
[考研] 08工科求调剂286 +3 tgs_001 2026-03-28 3/150 2026-03-29 18:29 by 1018329917
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +4 手机用户 2026-03-26 4/200 2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭